c. Uji kualitatif UV protection �-karoten bleaching test
Pelat KLT hasil elusi yang telah dikeringkan beberapa saat dicelupkan dalam pereaksi
�-karoten. Sebelum warna pelat KLT tersebut diukur dengan menggunakan parameter warna lalu dicatat. Pelat KLT tersebut kemudian
disinari sinar UV dengan jarak sesuai hasil optimasi dan dihitung intensitas sinar dengan alat light meter. Perubahan warna yang terjadi diamati lalu
diukur dengan parameter warna pada menit ke 1, 3, 6, 9, dan 15. Replikasi 5 kali dilakukan dan perubahan warna yang terjadi dicatat lalu dihitung rata-rata
dan SD.
7. Uji kualitatif aktivitas antibakteri
a. Pembuatan media TSB cair
Sebanyak 3 g media TSB 30gL dilarutkan dalam 100 mL akuades, diaduk dengan batang pengaduk hingga homogen, kemudian media tersebut
diautoklaf. b.
Pembuatan media agar Sebanyak 3 g media TSB 30gL ditambahkan 1,2 bv agar dilarutkan
dalam 100 mL akuades. Diaduk dengan batang pengaduk hingga homogen, kemudian media tersebut diautoklaf.
c. Pembuatan larutan McFarland 0,5 1,6 x 10
8
CFU Larutan barium klorida 1,175 bv 0,05 mL ditambah 9,95 mL larutan
1 bv asam sulfat Schwalbe, Moore, dan Goodwin, 2007. d.
Pembuatan NaCl 0,9 bv NaCl 0,9 g ditimbang kemudian dilarutan dalam 100 mL akuades.
e. Preparasi bakteri uji
Bakteri uji yang digunakan adalah E.coli dan S.aureus. Kultur bakteri induk dari media miring diambil sebanyak 1 ose lalu dikulturkan pada media
TSB cair. Kultur bakteri diinkubasi selama 18 jam. f.
Pembuatan larutan induk bakteri Bakteri uji yang digunakan adalah E.coli dan S.aureus. Sebanyak 2
tabung reaksi disiapkan, masing-masing diisi dengan saline water 10 mL dan setarakan kekeruhannya menggunakan larutan standar Mc Farland 0,5
konsentrasi mikroba 1,6. 10
8
CFUml dengan penambahan bakteri ke dalam tabung reaksi.
g. Penyimpanan kultur bakteri
Sisa kultur bakteri yang belum digunakan untuk diuji, diambil 0,5 mL lalu dimasukkan ke dalam microtube. Gliserol sebanyak 5 vv dari 0,5 mL
kultur bakteri ditambahkan, yaitu 25. 10
-3
mL pada masing-masing microtube. Campuran dihomogenkan lalu diinkubasi selama 1 jam dalam inkubator
bersuhu 37°C. Setelah itu kultur bakteri disimpan dalam freezer. h.
Pembuatan kontrol kontaminasi media
Media agar sebanyak 15 mL diambil, dituang ke dalam petri steril secara pour plate
lalu dibiarkan memadat. Media diinkubasi selama 18 jam. i.
Pembuatan kontrol pertumbuhan bakteri uji
Media agar TSB sebanyak 15 mL diambil dalam tabung, dibiarkan memadat pada cawan petri steril. 100 µL bakteri diinokulasikan secara
