12. Uji kualitatif aktivitas UV
protection isolat
a. Preparasi sampel
Isolat disiapkan dengan konsentrasi 1 mgmL dengan menggunakan pelarut yang sesuai.
b. Kromatografi lapis tipis KLT isolat
Isolat ditotolkan pada pelat kromatografi lapis tipis KLT dengan mass loading
sebesar 10, 20, dan 30 µg, dielusi dengan jarak 5 cm menggunakan fase gerak kloroform : metanol 95 : 5 vv dan dikeringkan pada suhu ruang.
c. Uji kualitatif UV protection
Pelat KLT hasil elusi yang telah dikeringkan dicelupkan dalam pereaksi �-karoten 0,05 bv dalam kloroform. Sebelum disinari dengan UV, warna
pelat KLT diukur menggunakan parameter warna. Pelat KLT kemudian disinari dengan sinar UV dengan jarak sesuai hasil optimasi yaitu pada
ketinggian 50 cm dan dihitung intensitas sinar dengan alat light meter. Perubahan warna yang terjadi diamati pada menit ke 1, 3, 6, 9, 12, dan 15.
13. Uji kualitatif aktivitas antibakteri isolat
a. Preparasi sampel
Isolat disiapkan dengan konsentrasi 1 mgmL menggunakan pelarut yang sesuai.
b. Pembuatan media agar
Sebanyak 3 g media TSB 30gL ditambahkan 1,2 bv agar lalu dilarutkan dalam 100 mL akuades. Campuran diaduk dengan batang pengaduk
hingga homogen kemudian media tersebut diautoklaf.
c. Pembuatan NaCl 0,9 bv
Sebanyak 0,9 g NaCl ditimbang dan dilarutan dalam 100 mL akuades. d.
Pembuatan larutan induk bakteri Bakteri uji yang digunakan adalah S.aureus. Tabung reaksi yang diisi
dengan saline water 10 mL disiapkan dan setarakan kekeruhannya menggunakan larutan standar Mc Farland 0,5 konsentrasi mikroba 1,6. 10
8
CFUml dengan penambahan bakteri ke dalam tabung reaksi. e.
Pembuatan kontrol kontaminasi media Media agar sebanyak 15 mL diambil, dituang ke dalam cawan petri steril
secara pour plate lalu dibiarkan memadat. Inkubasi dilakukan selama 18 jam. f.
Pembuatan kontrol pertumbuhan bakteri uji Media agar TSB sebanyak 15 mL dalam tabung diambil, dibiarkan
memadat pada cawan petri steril.100 µL bakteri diinokulasikan secara spreading
dengan menggunakan cotton buds steril. Inkubasi dilakukan selama 18 jam.
g. Pembuatan kontrol positif
Media agar sebanyak 15 mL diambil, TSB dalam tabung, dibiarkan memadat pada cawan petri steril. 100 mikroliter bakteri diinokulasikan secara
spreading menggunakan cotton buds steril. Amoksisilin 5 mg ditimbang dan
dilarutkan dalam 5 mL akuades. Sebanyak 75, 100, dan 150 µg diambil lalu masing-masing ditotolkan pada paper disc dalam media agar yang telah
diinokulasikan bakteri. Inkubasi dilakukan selama 18 jam. h.
Uji kualitatif antibakteri
Kategori