2H
2
O
2
+ HBA
Peroxidase
Quinoneimine + 4H
2
O
Sebanyak 10 µL sampel serum darah dimasukkan ke dalam tabung dan ditambahkan 1 mL larutan reagen. Sebagai blanko digunakan 1 mL larutan reagen
dan sebagai standar digunakan standar kolesterol 10 µL dan ditambahkan 1 mL reagen. Larutan campuran divorteks, diinkubasi selama 10 menit pada suhu ruang
atau 5 menit pada suhu 37 °C. Absorbansi larutan dibaca pada λ 500 nm.
Penghitungan dilakukan melalui rumus: Prosedur pengujian
Konsentrasi mgdl = Abs Sampel Abs Standar
x Konsentrasi Standar
b. Pengukuran Kadar Trigliserida Megraw et al. 1979
Pengukuran kadar trigliserida dilakukan dengan metode enzymatic calorimetric test glycerol phosphate oxidase phenol amino phenozone GPO-
PAP . Reagen yang digunakan berasal dari kit pereaksi trigliserida, AMS
Diagnostic.
Trigliserida + 3 H Prinsip pengujian:
2
O
Lipase
Glycerol + ATP + ADP glycerol + 3RCOOH
Glycerol kinase
Glycerol-3-phosphate + O glycerol-3-phosphate
2
phospate
GPO
dihydroxyacetone + H
2
O H
2 2
O
2
+ 4chlorophenol + aminophenazone
peroksidase
Chinonimine pink + 4H
2
O
Sebanyak 10 µl sampel serum darah dimasukkan ke dalam tabung reaksi dan ditambahkan dengan 1.0 ml reagen. Larutan diinkubasi selama 20 menit 20-
25°C atau 10 menit 37°C. Absorbansi sampel dibaca terhadap blanko reagen pada λ 546 nm. Perhitungan dilakukan melalui rumus:
Prosedur pengujian:
Konsentrasi mgdl = Abs Sampel Abs Standar
x Konsentrasi Standar
c. Pengukuran Kadar HDL Stein Myers 1994
Reagen terdiri dari DSBmT N,N-bis 4-sulfobutyl-m-toluidine disodium salt 0.5 mmoll kolesterol oksidase 1.0 IUl, dan 4-aminoantipyrine 1.0 mmoll.
Prinsip pengujian
HDL cholesterol
Cholesterol esterase
Cholesterol + H
2
O H
2 2
O
2
+ 4-aminoantipyrine
Peroksidase
Komponen merah-keunguan + DSBmT
Sebanyak 3.0 µl sampel serum darah dimasukkan ke dalam tabung dan ditambahkan 300 µl larutan reagen lalu divorteks. Sebagai blanko digunakan 1.00
ml reagen. Larutan diinkubasi selama 5 menit 37°C. Absorbansi larutan dibaca pada λ 600 nm.
Prosedur pengujian:
Penghitungan dilakukan melalui rumus: Konsentrasi mgdl = Abs Sampel
Abs Standar x Konsentrasi Standar
d. Pengukuran Kadar LDL Friedewald 1972
Kadar low density lipoprotein LDL dapat dihitung dengan menggunakan rumus Friedewald:
LDL = Kolesterol total – Trigliserida5-HDL
3.3.3.3. Analisis Aktivitas Antioksidan Hati a.
Persiapan Homogenat Hati Singh et al. 2000
Hati sebanyak 1.25 g dicacah dalam kondisi dingin dalam 5 ml larutan PBS yang mengandung 11.5 gL KCl, kemudian disentrifus pada 1074 g 4000
rpm, 10 menit pada kondisi dingin 4°C sehingga diperoleh supernatan jernih homogenat. Homogenat ini digunakan untuk analisis kadar malonaldehid
MDA dan aktivitas enzim antioksidan superoksida dismutase SOD.
b. Pengukuran Aktivitas Enzim Superoksida Dismutase SOD Hati Kubo
