Optimasi Fraksinasi Metanol untuk Menarik Analit Validasi Metode Analisis Preparasi Sampel Buah Melon

H. Rancangan Penelitian

1. Optimasi

Washing SPE Homogenisasi melon Timbang 5 gram Tambahkan : 2 gram MgSO 4 0,5 gram NaCl 0,5 gram Na 3 CitR 0,25 gram Na 2 HCitR Tambahkan 5 mL asetonitril Gojog 1 menit dan vortex 2 menit Sentrifuge dengan kec. 5000rpm selama 5 menit Ambil 3 mL supernatant dan adisi dg 2uL intermediet A Ultrasonifikasi selama 5 menit Loading sampel dalam SPE Keringkan dan larutkan dalam 200 uL Tampung hasil eluat Washing dengan 5MeOH Washing dengan 100 Elusikan dengan 3 mL MeOH Tampung hasil Elusikan dengan 3 mL MeOH A B Injeksikan tampungan eluat tampungan PEMBUKTIAN HIPOTESIS 1

2. Fraksinasi Metanol untuk Menarik Analit

Homogenisasi melon Timbang 5 gram Tambahkan : 2 gram MgSO 4 0,5 gram NaCl 0,5 gram Na 3 CitR 0,25 gram Na 2 HCitR Tambahkan 5 mL asetonitril Gojog 1 menit dan vortex 2 menit Sentrifugasi dengan kec. 5000 rpm selama 5 menit Ambil 3 mL supernatant Tambahkan 1 ml aquabidest Tambahkan 50 µL standar larutan A Uapkan dengan gas N 2 Ultrasonifikasi selama 5 menit Loading pada SPE yang telah di conditioning Washing dengan 5 mL aquabidest Fraksinasi MeOH masing-masing 1mL sebanyak 5x 1 2 3 4 5 Keringkan Larutkan dengan 100 µL metanol Injeksikan pada GC-ECD Pembuktian Hipotesis 2

3. Validasi Metode Analisis

Ekstraksi Clean up Determinasi Dilakukan melalui tiga jalur adisi standart A; B; C. PEMBUKTIAN HIPOTESIS 1-2-3 Sampel + standart Sampel + standart Sampel + standart Kesalahan ekstraksi + clean up + determinasi Kesalahan clean up + determinasi Kesalahan determinasi Sampel blanko Sampel sesungguhnya A B C

4. Preparasi Sampel Buah Melon

Step 1 – Extraction Processes Tambahkan campuran garam : • 2 g MgSO 4 • 0,5 g NaCl • 0,5 g Na 3 citrate 2H 2 O • 0,25 g Na 2 H citrate 1.5H 2 O Homogenisasi melon hingga homogen Masukan 5 gram sampel yang telah dihomogenkan dalam tabung sentrifugasi 15 mL Tambahkan 5 mL asetonitril Gojog dengan kuat selama 1 menit vortex selama 2 menit Sentrifugasiselama 5 menit dengan kecepatan 5000 rpm Tampung semua hasil supernatan dalam flakon Reekstrasi dengan menambahkan kembali 5 mL asetonitril dalam tabung sentrifugasi Tampung kembali hasil supernatan dalam flakon yang sama Uapkan diatas waterbath dengan bantuan gas nitrogen Step 2 – Clean up Processes Coditioning : • 5 ml metanol • 5 ml aquabidest Larutkan dalam 500 µL aquabidest dan ultrasonifikasi selama 5 menit Loading ekstrak kedalam SPE C 18 yang telah diconditioning Washing menggunakan 5 mL aquabidest Tampung hasil clean-up dan keringkan Elusi sampel menggunakan 3 mL metanol Larutkan dalam 200 µL heksan dan injekkan ke GC dengan volume 2 µL Pembuktian Hipotesis 2

5. Uji Kelayakan SPE Apabila digunakan Lebih dari satu kali