F. Tata Cara Penelitian
Garis besar dari penelitian ini dibagi menjadi uji kesesuaian sistem GC- ECD, preparasi sampel melon, optimasi clean-up, validasi metode analisis residu
azoxystrobin dalam buah melon. Metode dikatakan valid jika dapat memenuhi parameter validitas yang meliputi akurasi, presisi, koefisien korelasi, LOD dan
LOQ.
1. Prosedur Pencucian Alat-Alat Gelas
Cuci alat dengan menggunakan aquadest sebanyak tiga kali dan ditunggu hingga kering. Cuci kembali alat menggunakan aceton tiga kali kemudian
keringkan. Terakhir cuci alat menggunakan metanol dengan tiga kali pengulangan
dan keringkan. 2.
Pembuatan Larutan Stok Azoxystrobin dan DCB
a. Pembuatan stok azoxystrobin. Ditimbang sejumlah lebih kurang 11,4
mg baku azoxystrobin dan larutkan dalam 1mL toluen sehingga didapatkan konsentrasi stok induk sebesar 11,4 mgmL.
b. Pembuatan stok DCB. Timbang 10mg DCB dan larutkan dalam 100
mL pelarut. Ambil 10 uL dan add hingga volume 1000 uL.
3. Pembuatan Larutan Intermediet
Azoxystrobin
a. Pembuatan larutan intermediet A. Ambil 40 µL dari stok induk dan
larutkan dalam 1000 µL heksan sehingga didapatkan larutan intermediet A
dengan konsentrasi 0,456 µgµL.
b. Pembuatan larutan intermediet B. Ambil 10 µL larutan intermediet A
diencerkan hingga volume 1000 µL heksan, sehingga didapatkan konsentrasi 0,456 x 10
-2
µg µL. 4.
Uji Kesesuaian Sistem GC-ECD
Uji kesesuaian sistem perlu dilakukan sebelum metode analisis terpilih dilaksanakan. Secara normal terdapat variasi dalam peralatan dan teknik analisis,
maka uji kesesuaian system perlu dilakukan untuk memastikan sistem operasional akhir adalah efektif dan memberikan hasil yang sesuai dengan tujuan analisis.
Kelayakan sistem dilihat dari beberapa parameter yaitu presisi, linearitas dan sensitivitas sistem GC-ECD.
a. Optimasi sistem GC-ECD. Optimasi terhadap sistem GC-ECD
dilakukan dalam uji kesesuaian sistem. Optimasi instrumen GC-ECD dilakukan sesuai dengan prosedur yang ditetapkan dalam petunjuk operasional alat yang
dilakukan oleh Sanjayadi 2014. b.
Kinerja kualitatif GC-ECD. Kinerja GC-ECD meliputi pemisahan standar azoxystrobin pada sistem atau performa GC-ECD, dan keajegan sistem.
Dilakukan dengan menginjeksikan larutan intermediet B dengan kadar 0,137 ng pada GC-ECD yang sudah dioptimasi sebanyak enam kali dibawah kondisi sistem
yang sama. c.
Kinerja kuantitatif GC-ECD. Dalam analisis kuantitatif GC-ECD meliputi parameter-parameter presisi, linearitas, rentang linearitas, sensitivitas
LOD IDL dan IQL, akurasi.
1 Presisi sistem GC-ECD. Repeatability sistem dilihat dari nilai RSD. Nilai
RSD ditetapkan dengan cara menginjeksikan sebanyak tiga kali larutan intermediet B dengan jumlah volume pengambilan 20 µL; 10 µL; 7 µL; 5
µL; ; 4 µL, 3 µL, 2 µL yang mana masing-masing ditambahkan 2 µL standar internal dan diencerkan menggunakan heksan hingga volume 200 µL.
Injeksikan pada GC-ECD dengan menggunakan volume injeksi 2 µL sehingga didapatkan massa berturut-turut sebesar 0,912 ng; 0,456 ng; 0,319
ng; 0,228 ng; 0,182 ng, 0,137 ng dan 0,091 ng. Diperoleh respon sistem yang berupa luas puncak azoxystrobin pada tiap kadar, sehingga dapat dihitung
nilai rata-rata respon factor RF , standar deviasi RF dan RSD RF. 2
Linearitas hubungan kadar baku azoxystrobin dengan respon sistem GC- ECD. Koefisien korelasi r digunakan sebagai penentu linearitas hubungan
kadar baku azoxystrobin dengan respon yang berupa luas puncak azoxystrobinstandar internal. Nilai parameter r dapat ditetapkan dengan
menginjeksikan sebanyak tiga kali larutan intermediet B dengan volume pengambilan 20 µL; 10 µL; 7 µL; 5 µL; ; 4 µL; 3 µL dan 2 µL yang masing-
masing ditambahkan 2 µL standar internal dan diencerkan menggunakan heksan hingga volume 200 µL. Injeksikan pada GC-ECD dengan
menggunakan volume injeksi 2 µL sehingga didapatkan massa berturut-turut sebesar 0,912 ng; 0,456 ng; 0,319 ng; 0,228 ng; 0,182 ng; 0,137 ng; dan
0,091 ng. Lakukan perhitungan dengan menggunakan program statistik powerfit hingga didapatkan hubungan antara kadar azoxystrobin dengan rasio
puncak azoxystrobinluas puncak DCB serta nilai statistik lain seperti intersep a dan slope b.
3 Sensitivitas sistem GC-ECD. Beberapa parameter sensitivitas adalah nilai
LOD IDL, IQL dan slope. Parameter ini dapat ditetapkan dengan cara menginjeksikan sebanyak tiga kali larutan intermediet B dengan volume
pengambilan 20 µL; 10 µL; 7 µL; 5 µL; ; 4 µL; 3 µL; 2 µL; 1 µL yang masing-masing ditambahkan 2 µL standar internal dan diencerkan
menggunakan heksan hingga volume 200 µL. Injeksikan pada GC-ECD dengan menggunakan volume injeksi 2 µL sehingga didapatkan massa
berturut-turut sebesar 0,912 ng; 0,684 ng; 0,456 ng; 0,319 ng; 0,228 ng; 0,182 ng; 0,137 ng; 0,091 ng; 0,046 ng. Lakukan perhitungan dengan menggunakan
program statistik powerfit hingga didapatkan hubungan antara kadar azoxystrobin dengan rasio puncak azoxystrobinluas puncak DCB serta nilai
statistik lain seperti LODIDL, IQL dan slope b. 4
Akurasi. Pengukuran kedekatan antara nilai yang sebenarnya dengan nilai yang terukur dapat ditetapkan dengan menggunakan D. Semakin kecil D
maka kedekatan semakin baik. Parameter ini dapat ditetapkan dengan cara menginjeksikan larutan intermediet B dengan volume pengambilan 20 µL; 15
µL; 10 µL; 7 µL; 5 µL; ; 4 µL; 3 µL; 2 µL; 1 µL yang masing-masing ditambahkan 2 µL standar internal dan diencerkan menggunakan heksan
hingga volume 200 µL. Injeksikan pada GC-ECD dengan menggunakan volume injeksi 2 µL sehingga didapatkan massa berturut-turut sebesar 0,912
ng; 0,684 ng; 0,456 ng; 0,319 ng; 0,228 ng; 0,182 ng; 0,137 ng; 0,091 ng;
0,046 ng. Lakukan perhitungan dengan menggunakan program statistik powerfit hingga didapatkan persamaan y=bx+a untuk dapat menghitung D.
5. Preparasi Sampel Melon
Kategori