Cara pengujian dengan pengenceran: Kontrol positif Kontrol negatif Kontrol Reagen

117

5.2 Tes Penegasan

1. Setiap tabung yang positif pada tes perkiraan dikocok, kemudian dipindahkan dengan oselop ke dalam EC Broth. 2. Inkubasikan pada inkubator suhu 35 C ± 0,5 C selama 24 ± 2 jam Reaksi dinyatakan positif bila terbentuk gas dalam tabung fermentasi. Bila tidak ada reaksi gas, diinkubasikan kembali sampai 48 jam ± 3 jam 3. Bila pada tabung fermentasi tidak terbentuk gas dalam 48 jam ± 3 jam, maka tes penegasan dinyatakan negative, bila pada tabung fermentasi terbentuk gas dalam waktu 48 jam ± 3 jam, maka tes penegasan dinyatakan positif. Hitung MPN total coliform dengan menggunakan tabel MPN dari jumlah tabung BGLB yang positif, dari jumlah tabung BGLB yang positif dibaca pada tabel MPN.

5.3 Cara pengujian dengan pengenceran:

1. Disiapkan 15 tabung media LTB single volume 10 ml. 2. Tabung kultur disusun pada rak tabung. 3. Dilakukan pengenceran contoh uji dengan cara mengambil 1 ml contoh uji menggunakan pipet steril masukkan ke dalam tabung yang berisi 9 ml pengenceran steril secara aseptis, dikocok agar contoh uji homogen. Dari perlakuan ini diperoleh pengenceran 10 1 . 4. Dari contoh uji dengan pengenceran 10 1 diambil 1 ml kemudian dimasukkan ke dalam tabung berisi 9 ml pengencer steril, maka diperoleh pengenceran 10 2 . Demikian seterusnya hingga diperoleh tingkat pengenceran yang diinginkan. Universitas Sumatera Utara 118 5. Dipilih 3 seri tingkat pengenceran yang berurutan sesuai dengan kualitas contoh uji. 6. Dari setiap seri pengenceran dinokulasikan secara aseptis masing-masing 1 ml ke dalam 5 tabung LTB single volume 10 ml. 7. Maing-masing tabung kultur digojog agar contoh uji dan media tercampur rata. 8. Inkubasikan dengan inkubator pada suhu 35 C ± 0,5 C selama 2 x 24 jam. Selanjutnya diamati pembentukan gas dalam tabung durham. 9. Catat tabung kultur yang menunjukkan peragian laktosa yaitu dengan terbentuknya gas pada tabung durham. 10. Terbentuknya gas dalam tabung durham dinyatakan pertumbuhan positif dan dilanjutkan pada uji penegasan.

5.4 Cara Pembuatan Larutan Pengenceran

Pengenceran steril bisa dipakai NaCl 0,85 atau ringer solution

5.4.1 Pembuatan NaCl 0,85

Ditimbang NaCl pa 8,5 gr dilarutkan dalam 1 liter aquadest, dipanaskan di atas hot steater sampai larut, PH diatur 7,0 ± 0,2 dengan HCl dan NaOH, kemudian masukkan ke dalam tabung bertutup ulir masing-masing 9 ml, sterilkan ke dalam suhu 121 C selama a5 menit, setelah dingin sampai di tempat bersih dan kering. Universitas Sumatera Utara 119

5.4.2 Pembuatan larutan ringer solution

Diambil 2 tabel ringer, dilarutkan dalam 1 liter aquadest, dipanaskan di atas hot steater sampai larut, PH diatur 7,0 ± 0,2 dengan HCl dan NaOH, kemudian masukkan ke dalam tabung bertutup ulir masing-masing 9 ml, sterilkan ke dalam suhu 121 C selama a5 menit, setelah dingin sampai di tempat bersih dan kering.

5.4.3 Perhitungan

MPN 100 ml = Nilai MPN dari tabel x 10 Volume contoh terbesar dari seri pengenceran

6. Kendali Mutu

Instruksi kerja dalam kendali mutu bertujuan sebagai kontrol pekerjaan pada keseluruhan pengujian bakteri fecal coli dalam air. Kendali mutu terdiri dari:

6.1 Kontrol positif

1. Inokulasi 1 ose biakan kontrol Enterobakter Aerogenes ATCC 51697 ke dalam media LTB 2. Inkubasi pada suhu 35 ± 0,5 C selama 24 jam ± 2 jam 3. Diteruskan pada tes selanjutnya sama dengan prosedur pada sampel.

6.2 Kontrol negatif

1. Inokulasi 1 ose biakan bakteri control Staphylococcus aureus ATCC 25923 ke dalm media LTB 2. Inkubasikan pada suhu 35 ± 0,5 C selama 24 jam ± 2 jam 3. Diteruskan pada tes selanjutnya sama dengan prosedur pada sampel Universitas Sumatera Utara 120

6.3 Kontrol Reagen

1. Siapkan 1 media LTB 2. Media ini tidak diinokulasi oleh bakteri apapun untuk tes perkiraan 3. Inkubasikan pada suhu 35 ± 0,5 C selama 24 jam ± 2 jam 4. Diteruskan pada tes selanjutnya sama dengan prosedur pada sampel Universitas Sumatera Utara 121 INSTRUKSI KERJA METODE COLIFAECAL 1. Tujuan Instruksi kerja ini digunakan sebagai pegangan dalam pelaksanaan pengujian bakteri fecal coliform dalam air dengan menggunakan metode Most Propable Number MPN.

2. Ruang Lingkup

Untuk melaksanaka n pengujian bekteri fecal coli dalam air.

3. Acuan

American Public Health Association. Standart Methods for Examination of water Wastewater 21 st Edition. APHA. USA. 2005. Hal 9-48-9-51 Part 9221A- 9221C, 9221E. 4. Peralatan dan Bahan 4.1 Alat