procaspase-9 untuk memacu terjadinya apoptosis melalui aktivasi caspase-9. Aktivasi tersebut diikuti dengan aktivasi caspase-3 yang berikutnya akan
memacu terjadinya proteolisis substrat caspase-3 diantaranya PARP. Hal ini menguatkan dugaan bahwa induksi apoptosis oleh bubuk gel daun cincau hijau
melalui caspase-3 terjadi pada kanker payudara mencit C3H. Apoptosis melibatkan mekanisme yang kompleks baik melalui jalur mitokondria, melalui
reseptor kematian atau melalui jalur survival. Ketiga jalur tersebut melibatkan aktivasi caspase regulator baik caspase-8 ataupun caspase-9. Ada beberapa
bahan aktif tanaman pangan yang mampu menginduksi caspase-3 yaitu: resverastrol dari anggur Vitis vinifera, paradol dari jahe Zingiber officinale,
emodin dari lidah buaya Aloe vera Aggarwal Shisodia 2006.
4.2.5. Ekspresi Caspase-9
Pemberian bubuk gel daun cincau hijau terbukti mampu menginduksi apoptosis melalui aktivasi caspase-9 sebagai caspase inisiator pada jaringan
kanker mencit. Hal ini ditunjukkan dengan munculnya ekspresi caspase-9 pada BM 17 seperti yang terlihat pada Gambar 21 berikut:
\ Gambar 21. Ekspresi enzim caspase-9 dari jaringan kanker mencit. B1,2,3:
Kontrol positif; C1,2,3: Bubuk gel daun cincau hijau 0,88, D1,2,3: Bubuk gel daun cincau hijau 1,76; E1,2,3: Bubuk gel daun
cincau hijau 2,46.
Pada Gambar 21 terlihat bahwa. ekspresi caspase-9 hanya muncul pada D1 yaitu pada sampel kanker dengan dosis bubuk gel daun cincau hijau 1,76. Hal
ini menguatkan hipotesa bahwa apoptosis pada jaringan kanker payudara mencit yang diinduksi oleh bubuk gel daun cincau hijau terjadi melalui jalur apoptosis
intrinsik yang diinisiasi oleh caspase-9. Caspase-9 diaktifkan di jalur atas
B1 B2 B3 C1 C2 C3 D1 D2 D3 E1 E2 E3
B C
D E
Caspase-9
GAPDH
upstream dari apoptosis melalui mekanisme adanya stimuli di mitokondria menyebabkan beberapa protein dilepaskan dari ruang dalam membran
mitokondria ke sitoplasma. Protein yang dilepaskan antara lain sitokrom c, SMAC Second Mitochondria-derived Activator of CaspaseDIABLO Direct Inhibitor of
Apoptosis IAP-Binding Protein with Low PI , AIF Apoptosis-Inducing Factor,
EndoG Endonuclease G dan HTR-A2 High-Temperature-Requirement Protein- A2
. Selanjutnya, protein pro-apoptotik sitokrom c mengikat dan mengaktifkan Apaf-1 untuk mengikat ATP dan membentuk apoptosom. Pembentukan
apoptosom ini akan mengaktifkan caspase-9. Aktivasi caspase-9 selanjutnya menyebabkan terjadinya pemotongan DNA inti sel secara bertahap caspase
cascade yang melibatkan caspase-3, lalu caspase-7 yang mengeksekusi
substrat PARP sehingga terjadi kematian sel melalui apoptosis.
4.2.6. Ekspresi PARP
Pemberian bubuk gel daun cincau hijau juga terbukti mampu menginduksi apoptosis melalui aktivasi pemotongan PARP sebagai substrat oleh caspase
pada jaringan kanker mencit. Hal ini ditunjukkan dengan munculnya ekspresi PARP pada BM 89 seperti yang terlihat pada Gambar 22 berikut:
Gambar 22. Ekspresi enzim PARP dari dari jaringan kanker mencit C3H. B1,2,3:
Kontrol Positif; C1,2,3: Bubuk gel daun cincau hijau 0,88, D1,2,3: Bubuk gel daun cincau hijau 1,76; E1,2,3: Bubuk gel daun cincau
hijau 2,46.
Dari Gambar 22 terlihat bahwa ekspresi PARP terlihat terputus-putus, namun dapat dideteksi keberadaannya dalam jaringan kanker mencit. Munculnya
ekspresi PARP yang diinduksi oleh bubuk gel daun cincau hijau.merupakan
PARP
GAPDH B1 B2 B3 C1 C2 C3 D1 D2 D3 E1 E2 E3
B C
D E
B C
B1 B2 B3 C1 C2 C3 D1 D2 D3 E1 E2 E3
D E
B C
konfirmasi untuk memperkuat hipotesa bahwa telah terjadi apoptosis melalui aktivasi caspase-3 dan -7 yang telah memotong substrat PARP. Hasil
pengukuran intensitas ekspresi PARP terlihat pada Gambar 23 berikut.
Gambar 23. Grafik intensitas ekspresi PARP dari jaringan kanker mencit. B: Kelompok kontrol positif; C,D,E: Kelompok yang mendapat bubuk
gel daun cincau hijau berturut-turut 0,88; 1,76; 2,46.
Intensitas ekspresi PARP kelompok B, C, D dan E masing-masing adalah 25,96 ±12,9 AU; 70,35 ± 22,8 AU; 82,87 ± 36,7 AU; dan 61,99 ± 24,5 AU. PARP
adalah suatu enzim pengikat DNA yang mendeteksi dan menandai pemotongan untaian DNA. Adanya pemotongan PARP menjadi salah satu alat diagnosa untuk
mendeteksi apoptosis pada beberapa sel. Hal ini sesuai dengan hasil penelitian Bressenot et al. 2009 yang menyatakan bahwa adanya pemotongan PARP ke
dalam dua fragment yaitu 89 dan 24 kDa mengindikasikan bahwa terjadi aktivasi caspase, khususnya caspase-3, dan -7. Ada pula resverastrol dari anggur Vitis
vinifera dan quercetin dari jeruk Citrus sp. yang mampu menginduksi
pemotongan PARP Aggarwal Shisodia 2006.
20 40
60 80
100
B C
D E
PAR P
G APD
H
Kelompok
4.3. Pengaruh pemberian bubuk gel daun cincau hijau terhadap
