Kadar protein dihitung dengan rumus : Kadar protein = A-B x N HCl x 14,007 x 6,25 x 100
W g x 1000
Keterangan : A = ml titrasi HCl sampel, B = ml titrasi HCl blanko
3.8.2 Kadar urea AOAC 1995
Persiapan larutan standar :
Dilarutkan 5 gram urea pro analyst grade kedalam akuades dan diencerkan sampai 1 liter dengan akuades. Disiapkan larutan kerja 0,2; 0,4; 0,6; 0,8; 1,0; 1,2; 1,4; 1,6; 1,8 dan 2,0
mgml, dengan cara memipet 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, dan 20 ml larutan stok kedalam setiap labu ukur 250 ml, kemudian diencerkan sampai tanda tera dengan buffer fosfat.
Kurva standar dibuat dengan cara memipet 5 ml masing-masing larutan kerja kedalam tabung reaksi 25 ml dan ditambahkan 5 ml p-dimetil amino benzaldehid DMAB kedalam
masing-masing tabung. Disiapkan pula pereaksi blanko yang terdiri dari 5 ml larutan buffer dan 5 ml larutan DMAB. Semua tabung reaksi dikocok mekanik selama 10 menit dalam bak
air bersuhu 25
○
C. Masing-masing larutan standar dilakukan pengukuran nilai absorbansi pada panjang gelombang 420 nm.
Pengukuran Sampel :
Sampel sebanyak 1 g ditimbang dalam labu ukur 500 ml. Kemudian ditambahkan 100 g charcoal
, 250 ml akuades, 5 ml ZnOAc
2
dan 5 ml K
4
FeCN
6.
Kemudian distirer selama 30 menit dengan kecepatan tinggi dan volumenya ditempatkan sampai tanda tera. Larutan
didiamkan sampai terjadi endapan, kemudian disaring dengan kertas Whatmann no. 40 dan diambil filtratnya yang bening. Setelah itu filtrat dipipet sebanyak 5 ml ke dalam tabung
reaksi, ditambahkan 5 ml DMAB dan dikocok sampai merata. Bersama-sama dengan larutan blanko 5 ml, kedua tabung tersebut dibiarkan selama 10 menit dalam bak air 25
○
C. Absorbansi dibaca pada panjang gelombang 420 nm.
3.8.3 Kadar protein larut garam PLG Saffle dan Galbraeth 1964 diacu dalam
Wahyuni 1992
Sampel sebanyak 5 g ditambahkan 50 ml larutan NaCl 5 kemudian dihomogenkan dengan waring blender selama 2-3 menit, suhu dijaga agar tetap rendah. Setelah itu
disentrifus pada 3400 x G selama 30 menit dengan suhu 10 °C. Selanjutnya disaring menggunakan kertas saring Whatmann no. 1, filtrat ditampung dalam Erlenmeyer, disimpan
pada suhu 4 °C. Sebanyak 25 ml filtrat dianalisis kandungan proteinnya dengan menggunakan metode semi mikro Kjeldahl. Perhitungan kadar protein larut garam adalah:
Kadar PLG = A-B x N HCl x 14,007 x FP x 6,25 x 100 W g x 1000
Keterangan : A = ml titrasi HCl sampel; B = ml titrasi HCl blanko
3.8.4 Nilai pH Suzuki 1981
