Penelitian dilakukan sebanyak dua tahap. Setiap tahap dilakukan pengukuran 13 sampel. Langkah kerja:
27
1. Menyiapkan alat dan bahan
2. Memasukkan blanko, standar dan sampel masing-masing sebanyak 10 µl
secara duplo kedalam tabung reaksi 3.
Menambahkan Reagen 1000 µl kedalam masing-masing tabung reaksi secara duplo menggunakan mikropipet
4. Mencampur secara gentle, kemudian inkubasi selama 20 menit pada suhu
20-25
o
C 5.
Memasukkan ke dalam kuvet kemudian memasukkan ke dalam alat spektrofotometer
6. Membaca absorbansi dalam waktu 60 menit dengan panjang gelombang
500 λ 7.
Menghitung konsentrasi dengan menggunakan standar atau kalibrator dengan rumus:
Cholesterol [mgdL] = x Cons.StandardCal [mgdl]
2. Pengukuran kadar Trigliserida
1. Menyiapkan alat dan bahan
2. Memasukkan blanko, standar dan sampel masing-masing sebanyak 10 µl
secara duplo kedalam tabung reaksi 3.
Menambahkan Reagen 1000 µl kedalam masing-masing tabung reaksi secara duplo menggunakan mikropipet
4. Mencampur secara gentle, kemudian inkubasi selama 20 menit pada suhu
20-25
o
C 5.
Memasukkan ke dalam kuvet kemudian memasukkan ke dalam alat spektrofotometer
6. Membaca absorbansi dalam waktu 60 menit dengan panjang gelombang
500 λ. 7.
Menghitung konsentrasi sampel dengan rumus: C = 200 x
mgdl atau
C = 2.28 x mmoll
3. Pengukuran kadar HDL
1. Mencampur serum responden 200 ul dan R1 HDL cholesterol 500 ul ke
dalam tabung reaksi 2.
Inkubasi selama 10 menit pada suhu ruang 3.
Sentrifugasi selama 10 menit dengan 5785 rpm 4.
Memisahkan supernatan dari hasil presipitasi 5.
Mengambil 100 ul supernatan dan campurkan dengan R2 cholesterol1000 ul ke dalam tabung reaksi dan juga untuk kontrol yang
terdiri dari: -
Reagen blanko: akuades 100 ul dan R2 1000 ul -
Standard: standar 100 ul dan R2 1000 ul 6.
Inkubasi selama 10 menit pada suhu ruang 7.
Memasukkan ke dalam kuvet kemudian memasukkan ke dalam alat spektrofotometer
8. Membaca absorbansi dalam waktu 60 menit dengan panjang gelombang
500 λ 9.
Menghitung absorben sampel dan standar dengan cara mengurangi sampel dan satndar tersebut dengan absorben reagen blanko
Absorben = 175 X mgdl
