45 merata, kemudian diinkubasi di dalam inkubator CO
2
selama ± 5 menit dan ditambahkan 4 mL MK untuk menginaktifkan tripsin. Diresuspensi sel dengan
mikropipet agar sel terlepas satu-satu tidak menggerombol. Diamati keadaan sel di mikroskop inverted. Resuspensi sel kembali jika masih ada sel yang
menggerombol lalu ditransfer sel ke dalam tabung konikel Doyke, dkk., 2000.
3.14 Penghitungan Sel HeLa dan Sel Vero
Persiapkan alat dan kondisikan bahan pada suhu ruangan, ambil 10 µL panenan sel dan pipetkan ke dalam hemositometer. Hitung jumlah sel di bawah
mikroskop dengan menggunakan counter. Hemositometer terdiri dari 4 kamar hitung A, B, Cdan D, setiap kamar hitung terdiri dari 16 kotak Gambar 3.1.
Gambar 3.1 Hemositometer kamar hitung
Hitung sel pada 4 kamar hemositometer, sel yang gelap mati dan sel yang berada dibatas luar di sebelah kiri dan atas tidak ikut dihitung. Sel di batas
kanan dan bawah ikut dihitung. Hitung jumlah sel per mL dengan rumus: ∑selmL=
∑ sel A+ ∑ sel B+∑ sel C + ∑ sel D 4
×10
4
Hitung jumlah total sel yang diperlukan. Misalnya untuk menanam sel pada tiap sumuran 96-well plate, maka jumlah total sel yang diperlukan adalah
1x10
4
sumuran x 100 sumuran dibuat lebih = 1x10
6
sel
46 Hitung volume panenan sel yang diperlukan dalam mL dengan rumus:
Volume panenan sel = Jumlah total sel yang diperlukan
Jumlah sel terhitungml Ambil volume panenan sel, transfer ke tabung konikel baru kemudian
tambahkan MK sampai total volume yang diperlukan CCRC, 2009.
3.15 Pembuatan Larutan Uji
Ekstrak etanol buah andaliman ditimbang sebanyak 50 mg dalam polytube, kemudian dilarutkan dalam dimetilsulfoksida DMSO sebanyak 500
µ L, divortex agar sampel terlarut sempurna kemudian di cukupkan dengan media kultur, kemudian dibuat pengenceran selanjutnya sampai diperoleh larutan uji
dengan konsentrasi 1000 µgmL; 500 µgmL; 250 µgmL; 125 µgmL; 62,5 µgmL; 31,25 µ gmL dan15,625 µgmL semua pengenceran dilakukan dengan
menggunakan MK.
3.16 Pengujian Sitotoksik
Pengujian sitotoksik meliputi pengujian terhadap sel HeLa dan sel Vero yang selanjutnya dikonversi ke dalam persen sel hidup dan dianalisis dengan
SPSS19 lalu dihitung indeks selektivitasnya.
3.16.1 Pengujian sitotoksik terhadap sel HeLa
Sel HeLa ditanam pada microplate 96 sumuran sehingga diperoleh kepadatan 1 x 10
4
selsumuran dan diinkubasi selama 24 jam untuk mendapatkan pertumbuhan yang baik. Setelah 24 jam medium diganti dengan yang baru
kemudian ditambahkan larutan ujidengan berbagai konsentrasi menggunakan cosolvent DMSO dan diinkubasi pada suhu 37ºC dalam inkubator CO
2
5 selama 24 jam. Pada akhir inkubasi, media dan larutan uji dibuang kemudian sel dicuci
