39 dan ditimbang sampai bobot tetap. Kadar abu yang tidak larut dalam asam
dihitung terhadap bahan yang telah dikeringkan Depkes RI, 1995.
3.7 Pembuatan Ekstrak
Pembuatan ekstrak dilakukan secara maserasi dengan pelarut etanol 96, sebanyak 300 gram serbuk simplisia buah andaliman dimasukkan ke dalam bejana
tertutup, ditambahkan 2250 mL etanol 96, lalu bejana ditutup dan dibiarkan selama 5 hari terlindung dari cahaya sambil sering diaduk. Setelah 5 hari maserat
disaring. Ampas dicuci dengan pelarut etanol 96 secukupnya hingga diperoleh 3000 mL, lalu dipindahkan dalam bejana tertutup dan dibiarkkan ditempat sejuk
terlindung dari cahaya selama 2 hari, kemudian dienaptuangkan dan disaring Depkes RI, 1979.
Maserat dikumpulkan dan diuapkan dengan rotary evaporator pada temperatur tidak lebih dari 50
o
C sampai diperoleh ekstrak kental. Ekstrak yang diperoleh 54,575 gram. Bagan ekstraksi dapat dilihat pada Lampiran 17 , halaman
84.
3.8 Sterilisasi Alat dan Bahan
Alat-alat yang digunakan dalam uji aktivitas sitotoksik ini, disterilkan
terlebih dahulu sebelum dipakai. Alat-alat gelas dan plastik yang akan digunakan disterilkan di dalam autoklaf pada suhu 121
o
C selama 15 menit Lay, 1994.
3.9 Pembuatan Media
3.9.1 Pembuatan media Roswell Park Memorial Institute RPMI
Komposisi: RPMI sachet, spesifikasi: GIBCO Lot No. 921956, dengan L- glutamine tanpa NaHCO
3
, netto 10,4 gram
40 Hepes
2 gram NaHCO
3
2 gram HCl 1N
secukupnya NaOH 1N
secukupnya Aquabides steril ad
1 liter Cara Pembuatan:
Sebanyak 1 sachet RPMI, 2 gram Hepes dan 2 gram NaHCO
3
dimasukkan ke dalam erlenmeyer, ditambahkan 800 mL aquabides steril, dihomogenkan
dengan menggunakan stirer magnet, kemudian pH diukur dengan pH meter pH yang diiinginkan adalah 7,2 - 7,4; karena terlalu basa maka digunakan HCl 1N
untuk menyesuaikan pH. Kemudian ditambahkan aquabides steril sampai 1 L, dilakukan sterilisasi dengan filter vaccum didalam LAF Laminar Air Flow,
dipasang filter aparatus steril pada botol duran 1 L steril, lakukan proses penyaringan dengan filter, aliquot media ditampung dalam botol duran 500 mL,
diberi identitas pada botol media nama media, tanggal pembuatan, expire datedan nama pembuat, dan disimpan pada suhu 2 - 8
o
C Sambrook, dkk., 1989.
3.9.2 Pembuatan media kultur lengkap MK-RPMI
Komposisi: Fetal Bovine Serum FBS 10
Penisilin-Streptomisin 2
Fungizon Amfoterisin B 0,5
RPMI ad 100 mL
Cara Pembuatan: Campur semua bahan di atas, dan dilakukan di dalam LAF Laminar Air
Flow, beri identitas pada botol MK nama media, tanggal pembuatan, expire date dan nama pembuat, simpan pada suhu 2 - 8
o
C Sambrook, dkk., 1989.