43 menggerombol pada bagian tertentu. Diberi identitas pada flask kultur, kemudian
simpan dalam inkubator CO
2
Doyle, dkk., 2000.
3.11.2 Penumbuhan sel Vero
Dipersiapkan alat dan dikondisikan bahan pada suhu ruangan. Seluruh pekerjaan dilakukan di dalam LAF. Aliquot 10 mL media M199 dimasukkan ke
dalam tabung konikel 15 mL, kemudian ampul yang berisi sel biakan diambil dari freezer -80
o
C atau tangki nitrogen dan cairkan pada suhu kamar. Suspensi sel dalam ampul diambil, lalu dimasukkan tetes demi tetes kedalam media M199
yang telah disiapkan, disentrifuge pada 600 rpm selama 5 menit. Supernatan dibuang lalu tambahkan 4 mL MK-M199 dan resuspensi hingga homogen.
Ditransfer masing-masing 2 mL ke dalam flask kultur baru. Ditambahkan 5 mL MK ke dalam masing-masing flask kultur dan dihomogenkan. Diamati kondisi sel
dengan menggunakan mikroskop inverted. Pastikan sel homogen pada seluruh permukaan flask kultur tidak menggerombol pada bagian tertentu. Diberi
identitas pada flask kultur, kemudian simpan dalam inkubator CO
2
5 Doyle, dkk., 2000.
3.12 Subkultur Sel
3.12.1 Subkultur sel HeLa
Dipersiapkan alat dan kondisikan bahan pada suhu ruangan, dilakukan pengerjaan pada LAF. Dilakukan proses panen sel dengan cara mengambil 500
µ L panenan sel dan masukkan ke dalam flask kultur. Ditambahkan 6 mL MK- RPMI, homogenkan. Inkubasi sel pada inkubator CO
2
, diamati kondisi sel pada keesokan harinya Doyle, dkk., 2000.
44
3.12.2 Subkultur sel Vero
Dipersiapkan alat dan kondisikan bahan pada suhu ruangan, dilakukan pengerjaan pada LAF. Dilakukan proses panen sel dengan cara mengambil 500
µ L panenan sel dan masukkan ke dalam flask kultur. Ditambahkan 6 mL MK- M199, homogenkan. Inkubasi sel pada inkubator CO
2
5, diamati kondisi sel pada keesokan harinya Doyle, dkk., 2000.
3.13 Panen Sel
3.13.1 Panen sel HeLa
Dipersiapkan alat dan kondisikan bahan pada suhu ruangan, diamati kondisi sel. Panen dilakukan apabila sel telah dalam kondisi 80 konfluen, semua
pekerjaan dilakukan pada ruangan dengan LAF. Dibuang MK-RPMI dari flask dengan mikropipet atau pipet pasteur, dicuci sel 2 kali dengan 5 mL PBS
Phosphate Buffer Saline, ditambahkan 400 µL tripsin - EDTA 0,25 secara merata, kemudian diinkubasi di dalam inkubator CO
2
selama ± 5 menit dan ditambahkan 4 mL MK untuk menginaktifkan tripsin. Diresuspensi sel dengan
mikropipet agar sel terlepas satu-satu tidak menggerombol. Diamati keadaan sel di mikroskop inverted. Resuspensi sel kembali jika masih ada sel yang
menggerombol. Ditransfer sel ke dalam tabung konikel Doyke, dkk., 2000.
3.13.2 Panen sel Vero
Dipersiapkan alat dan kondisikan bahan pada suhu ruangan, diamati kondisi sel. Panen dilakukan apabila sel telah dalam kondisi 80 konfluen, semua
pekerjaan dilakukan pada ruangan dengan LAF. Dibuang MK-M199 dari flask dengan mikropipet atau pipet pasteur, dicuci sel 2 kali dengan 5 mL PBS
Phosphate Buffer Saline, ditambahkan 400 µ L tripsin - EDTA 0,25 secara
Kategori