46 Hitung volume panenan sel yang diperlukan dalam mL dengan rumus:
Volume panenan sel = Jumlah total sel yang diperlukan
Jumlah sel terhitungml Ambil volume panenan sel, transfer ke tabung konikel baru kemudian
tambahkan MK sampai total volume yang diperlukan CCRC, 2009.
3.15 Pembuatan Larutan Uji
Ekstrak etanol buah andaliman ditimbang sebanyak 50 mg dalam polytube, kemudian dilarutkan dalam dimetilsulfoksida DMSO sebanyak 500
µ L, divortex agar sampel terlarut sempurna kemudian di cukupkan dengan media kultur, kemudian dibuat pengenceran selanjutnya sampai diperoleh larutan uji
dengan konsentrasi 1000 µgmL; 500 µgmL; 250 µgmL; 125 µgmL; 62,5 µgmL; 31,25 µ gmL dan15,625 µgmL semua pengenceran dilakukan dengan
menggunakan MK.
3.16 Pengujian Sitotoksik
Pengujian sitotoksik meliputi pengujian terhadap sel HeLa dan sel Vero yang selanjutnya dikonversi ke dalam persen sel hidup dan dianalisis dengan
SPSS19 lalu dihitung indeks selektivitasnya.
3.16.1 Pengujian sitotoksik terhadap sel HeLa
Sel HeLa ditanam pada microplate 96 sumuran sehingga diperoleh kepadatan 1 x 10
4
selsumuran dan diinkubasi selama 24 jam untuk mendapatkan pertumbuhan yang baik. Setelah 24 jam medium diganti dengan yang baru
kemudian ditambahkan larutan ujidengan berbagai konsentrasi menggunakan cosolvent DMSO dan diinkubasi pada suhu 37ºC dalam inkubator CO
2
5 selama 24 jam. Pada akhir inkubasi, media dan larutan uji dibuang kemudian sel dicuci
47 dengan PBS. Pada masing-masing sumuran, ditambahkan 100
μL media kultur dan 10
μL MTT konsentrasi 5 mgmL. Untuk mengamati viabilitasnya, sel diinkubasi kembali selama 4 - 6 jam dalam inkubator CO
2
5 pada suhu 37
o
C. Reaksi MTT dihentikan dengan reagen stopper SDS 10 dalam HCl 0,1 N, lalu
plate dibungkus dengan aluminium foil agar tidak tembus cahaya pada suhu kamar dan dibiarkan selama satu malam. Sel yang hidup bereaksi dengan MTT
membentuk warna ungu. Hasil pengujian dibaca dengan ELISA reader pada panjang gelombang 595 nm Adina, 2009.
3.16.2 Pengujian sitotoksik terhadap sel Vero
Endapan sel Vero disuspensikan pada media M199 dan ditentukan kerapatan sel sebesar 2 x 10
5
selmL. Suspensi sel dibagi ke dalam sumuran- sumuran yang tiap sumuran sebanyak 100 µm suspensi dan kemudian
ditambahkan ke dalamnya larutan atau suspensi ekstrak sampel uji dalam berbagai konsentrasi yang selanjutnya disebut sampel. Sampel diinkubasi sampai
pertumbuhan sel konfluen. Pada tiap sumuran ditambahkan 100 μL media kultur
RPMI dan 10 μL MTT Sigma konsentrasi 5 mgml. Sel diinkubasi kembali selama 4 - 6 jam dalam inkubator CO
2
5 bersuhu 37ºC. Reaksi MTT dihentikan dengan reagen stopper SDS 10 dalam HCl 0,1 N, lalu plate dibungkus agar
tidak tembus cahaya dan dibiarkan selama satu malam pada suhu kamar. Serapan dibaca dengan ELISA reader pada panjang gelombang 595 nm Handayani, dkk.,
2001; Adina, 2009.
