55 dengan buffer sebanyak 5 kali sampel kemudian dimasukkan ke dalam sumur
separating gel, selanjutnya steker elektroda dipasang pada power supply yang distabilkan dengan stabilizer yang dihubungkan pada listrik tegangan 125 Volt, selama
lebih kurang 1,5 jam atau sampai migrasi sampel mencapai 1 cm dari bawah gel. Setelah itu gel diambil dari kedua plat elektroforesis dengan menggunakan spatula,
kemudian dilanjutkan pewarnaan dengan menggunakan Coomassie Brilliant Blue; dengan cara sebagai berikut: gel ditempatkan dalam wadah yang telah diisi larutan
staining Coomassie Brilliant Blue lebih kurang 20 ml, kemudian diagitasi konstan dengan gerakan pelan lebih kurang 30 menit. Setelah 30 menit larutan Coomassie
Brilliant Blue dihilangkan atau destaining dengan menggunakan campuran methanol; asam asetat glasial; aquades = 2 : 1 : 7 kurang lebih 20 ml. Gel yang telah dihilangkan
warnanya diagitasi konstan sampai pita-pita protein yang terbentuk terlihat nyata dan warna latar gel menjadi terang setelah lebih kurang 24 jam.
9. Percobaan Karakterisasi Gugus Fungsi dengan Spektrofotometer Infra Merah dan Spektrofotometer UV
Untuk mengetahui komponen senyawa antimikroba dari fraksi yang paling kuat aktivitas antimikrobanya secara kualitatif untuk menunjukkan senyawa protein dan
secara kuantitatif akan diperoleh pita protein dan berat molekulnya, kemudian dilanjutkan karakterisasi protein dengan menggunakan spektrofotometer infra merah,
dan kemudian dilanjutkan identifikasi karbohidrat gula dengan spektrofotometer ultra violet.
Pengujian adanya gugus fungsi protein dilakukan dengan alat spektroskopi infra merah Nur, 1989. Sampel fraksi yang paling kuat aktivitas antimikrobanya dan
laktoferin sebagai pembanding masing-masing dicampur garam KBr dengan perbandingan 1:100. Bahan-bahan di gerus sampai halus hingga merata, kemudian
ditekan pada alat cetak sampai diperoleh lapisan tipis AOAC 16 . 058, 1995. Berkas radiasi spektrofotometer akan terbagi dua, sebagian melewati sampel dan sebagian
melawati blanko. Setelah kedua berkas tersebut bergabung kembali, kemudian
56 dilewatkan ke dalam monokromator. Berkas radiasi infra merah yang melewati
monokromator akan dipantulkan oleh cermin-cermin dan akhirnya ditangkap oleh detektor. Signal yang dihasilkan oleh detektor kemudian direkam sebagai spektrum
infra merah yang berbentuk puncak-puncak absorpsi. Absorpsi spektrum infra merah ini menunjukkan terjadinya hubungan antara absorpsi dan frekuensi atau bilangan
gelombang atau panjang gelombang, sebagai absis adalah frekuensi cm
-1
atau bilangan gelombang cm
-1
atau panjang gelombang nm dan sebagai ordinat transmitans atau absorbans Pomeranz and Meloan,1994.
Identifikasi jenis gula dilakukan dengan melakukan pemindaian scanning larutan gula menggunakan spektrofotometer ultra violet Nollet, 1996. Untuk
mengetahui jenis gula dalam fraksi senyawa antimikroba dari susu kuda digunakan gula standar yaitu maltosa, sukrosa, laktosa, glukosa, fruktosa dan galaktosa dengan
cara membandingkan pola hubungan panjang gelombang dengan serapan sinar UV yang terbentuk. Sinar ultra violet menyerap struktur molekul bentuk cincin ikatan
rangkap pada satu atau lebih panjang gelombang dari 190 - 300 nm. Prinsip yang digunakan untuk identifikasi jenis gula adalah pola serapan absorbanse sinar UV
pada berbagai panjang gelombang yang bersifat spesifik untuk setiap jenis senyawa gula.
10. Percobaan Pengembangan Produksi Konsentrat Antimikroba dari Susu Kuda Sumbawa
