Identifikasi senyawa dari isolat aktif ekstrak kacang hijau Bagan alur penelitian

5;7,5;10 µg masing-masing ditotolkan dalam paper disc dalam media agar yang telah diinokulasikan bakteri tersebut. Inkubasi selama 18 jam dan dibandingkan dengan perlakuan. h. Uji kualitatif antibakteri Isolat dengan konsentrasi 1 mgmL disiapkan. Paper disc tersebut diisikan isolat senyawa dengan mass loading 50;100;200 µg kemudian dikeringkan pada petri steril, setelah kering diletakkan dalam media berkoloni S. aureus . Selama 18 jam diinkubasi, hasil positif ditandai dengan adanya zona hambat pada media tersebut.

15. Identifikasi senyawa dari isolat aktif ekstrak kacang hijau

a. Kromatografi lapis tipis KLT isolat ekstrak kacang hijau Isolat ekstrak kacang hijau dalam konsentrasi masing-masing 1 mgmL disiapkan. Tiap isolat ditotolkan 10 µL pada pelat KLT, dielusi dengan jarak elusi 5 cm, menggunakan fase gerak kloroform : metanol 7:3 vv dan dikeringkan dalam suhu ruang. b. Deteksi secara fisik Pelat KLT hasil elusi dikeringkan pada suhu ruang, kemudian pelat KLT tersebut dideteksi menggunakan lampu UV 254 nm dan 366 nm, hasil elusi kemudian dibandingkan dan dihitung nilai Rf hasil elusi. c. Indentifikasi senyawa dengan reagen semprot Pelat KLT hasil elusi disiapkan untuk diidentifikasi senyawa dengan menggunakan beberapa reagen semprot diantaranya yaitu, reagen Dragendorff, aluminium chloride AlCl 3 , ferric chloride FeCl 3 , vanilin sulfat, kemudian diamati dan dihitung nilai Rf dari bercak yang terbentuk.

16. Bagan alur penelitian

a. Bagan alur penelitian ekstrak kacang hijau Kacang hijau Simplisia kacang hijau Ekstrak kacang hijau Hasil triturasi n-heksana Uji aktivitas penangkapan radikal bebas, UV protection dan antibakteri secara kualitatif Hasil triturasi Kloroform : metanol 7:3 Isolat Bercak KLT ekstrak kacang hijau yang aktif Isolat aktif Uji aktivitas penangkapan radikal bebas, UV protection dan antibakteri secara kualitatif Proses pembuatan simplisia Ekstraksi : - Maserasi - Penyaringan - Penguapan - Pemekatan Kromatografi kolom , dengan step gradien Metode triturasi b. Bagan alur penelitian ekstrak kulit dan keping biji kacang hijau Kacang hijau Kulit biji kacang hijau Keping biji kacang hijau Simplisia kulit biji kacang hijau Simplisia keping biji kacang hijau Ekstrak kulit biji kacang hijau Ekstrak keping biji kacang hijau Bagian kacang hijau yang bertanggung jawab terhadap aktivitas penangkapan radikal bebas kacang hijau Pengupasan kacang hijau Proses pembuatan simplisia Ekstraksi - Kromatografi lapis tipis - Uji penangkapan radikal bebas 42 BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN

A. Hasil Determinasi Sampel