Pembuatan Media KULTUR JARINGAN

358 persenyawaan KNO 3 . y Larutan stok C untuk persenyawaan CaCl 2 .2H 2 O. y Larutan stok D untuk persenyawaan MgSO 4 .7H 2 O dan KH 2 PO 4 . y Larutan stok E untuk persenyawaan FeSO 4 .7H 2 O dam Na2EDTA y Larutan Stok A, 1 liter 50 kali konsentrasi Menimbang persenyawaan NH 4 NO 3 sebanyak 83.50 gram. Bahan yang telah ditimbang, dimasukkan ke dalam gelas piala bersih yang sudah berisi aquadest atau air bebas ion kira-kira 700 ml. Kemudian diaduk hingga larut merata. Larutan, kemudian dipindahkan ke dalam labu takar 1 liter yang telah dibilas dengan aquadest. Gelas piala dibilas dengan aquadest dan air bilasan dituang ke dalam labu takar sebaiknya bilaslah dengan 50 ml aquadest 2-3 kali. Kemudian ditambahkan aquadest hingga volume larutan tepat pada 1 liter. Larutan telah jadi, lalu dipindahkan ke dalam erlenmeyerbotol reagent ukuran 1 liter yang bersih, diberi label A dan ditutup rapat. Larutan stok A dapat disimpan pada suhu kamar. Untuk membuat 1 liter media, dibutuhkan 20 ml larutan stok A.

a. Pembuatan Media

Dewasa ini beberapa media kultur jaringan dapat dibeli dalam bentuk bubuk yang telah dipersiapkan. Tergantung dari jenisnya, ada yang hanya mengandung garam makro dan mikro serta vitamin, ada juga yang lengkap sampai hormon dan gula. Formula ini memang memudahkan pekerjaan, tapi untuk suatu penelitian yang memerlukan perubahan komposisi dalam satu atau beberapa komponen, maka pemisahan komponen-komponen penyusun media perlu dilakukan. Dalam pembuatan media, langkah pertama adalah membuat stok dari media terpilih. Penggunaan larutan stok menghemat pekerjaan menimbang bahan yang berulang-ulang setiap kali membuat media. Selain itu, juga kadang-kadang timbangan yang dibutuhkan untuk menimbang jumlah kecil tidak tersedia dalam laboratorium. Setiap larutan stok dapat dipergunakan untuk kira-kira 50 liter-media, bahkan larutan stok mikro dapat dipergunakan sampai 200 liter media. Larutan stok,, bila dapat disimpan ditempat yang bertemperatur rendah dan gelap. Pembuatan larutan stok berdasarkan pengelompokan dalam stok makro, stok mikro, stok Fe, stok vitamin dan stok hormon terutama bila larutan stok tidak disimpan ter-lalu lama segera digunakan habis. Stok hormon dapat disimpan antara 2-4 minggu, sedangkan stok hara dapat disimpan 4-8 minggu. Dengan adanya larutan stok, pembuatan media selanjutnya hanya dengan teknik pengenceran dan pencanpuran saja. Hal yang perlu diperhatikan dalam pembuatan larutan stok adalah penyimpanan daya simpan larutan. Larutan yang sudah mengalami pengendapan, tidak dapat digunakan lagi. Di unduh dari : Bukupaket.com Tehnik pembenihan Tanaman 359 Pengendapan larutan stok umumnya terjadi bila kepekatan larutan terlalu tinggi. Oleh karena itu pengendapan larutan dapat dihindari dengan membuat larutan yang tidak terlalu pekat atau tidak menggunakan larutan campuran, yaitu dengan menbuat satu larutan stok hanya untuk satu jenis bahan terutama untuk unsur hara makro. Kondisi simpan juga perlu diperhatikan, karena ada beberapa bahar yang tidak tahan dalam suhu tinggi atau cahaya. Larutan stok kadang-kadang ditumbuhi mikroba. Larutan stok yang terkontaminasi mikroorganisme ini, juga tidak dapat digunakan lagi. Oleh karena itu kondisi simpan harus dijaga kebersihan dan tempat wadah larutan harus diusahakan. serapat mungkin.

b. Stok hara makro