29
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
Kadar air =
� � � � − � � � ℎ� � � � �
100 b.
Kadar abu Bahan dipanaskan pada temperatur dimana senyawa organik dan turunannya
terdestruksi dan menguap, sehingga menyisakan unsur mineral dan anorganik. Ditimbang 2 gram ekstrak dengan seksama ke dalam krus yang telah ditara,
dipijarkan perlahan-lahan hingga arang habis, diinginkan dan ditimbang. Jika dengan cara ini arang tidak dapat dihilangkan, tambahkan air panas, aduk, saring
melalui kertas saring bebas abu. Pijarkan kertas saring beserta sisa penyaringan dalam krus yang sama. Masukan filtrat ke dalam krus, uapkan dan pijarkan hingga
bobot tetap, timbang. Kadar abu total dihitung terhadap berat bahan uji. Kadar Abu Total =
� � � � � � ��
100
3.4.4 Penyiapan Hewan Uji
Tikus jantan galur Sprague-Dawley diaklimatisasi di Animal House Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan UIN Jakarta selama 1 minggu.
Diberikan makan dan minum ad libitum. Ekstrak etanol 70 daun pacing Costus spiralis diberikan secara oral menggunakan sonde sekali setiap hari selama 48
hari dengan dosis seperti tertera pada tabel rancangan percobaan Tabel 3.1. Dosis yang tertera merupakan hasil konversi dosis 25,50, dan 75 mgkgBB pada
mencit ke tikus Adnan, 2000. 1. Kelompok I diberikan suspensi Natrium CMC 0,5.
2. Kelompok II ekstrak etanol 70 daun pacing 12,5mgkgBB yang disuspensikan ke dalam Natrium CMC 0,5.
3. Kelompok III ekstrak etanol 70 daun pacing 25mgkgBB yang disuspensikan ke Natrium CMC 0,5.
4. Kelompok IV ekstrak etanol 70 daun pacing 37,5mgkgBB yang disuspensikan ke dalam Natrium CMC 0,5.
3.4.5 Pembuatan Preparat
Setelah 48 hari, masing-masing hewan coba dikorbankan untuk diambil organ testisnya. Tikus dibius dengan eter, kemudian dibedah. Diambil bagian
30
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
kauda epididimis dan dihitung jumlah spermatozoa kemudian bagian testis diambil untuk ditimbang dan dibuat preparat. Untuk mendapatkan sperma di
dalam sekresi epididimis dilakukan dengan cara sebagai berikut: kauda epididimis diambil dan diletakkan ke dalam cawan petri yang berisi NaCl 0,9. Kemudian
epididimis di plurut dalam wadah yang berisi NaCl fisiologis 0,9 tersebut disebut sebagai larutan stok yang digunakan untuk mengetahui kualitas dan
kuantitas spermatozoa. Suspensi sperma dari epididimis yang telah diperoleh dapat digunakan untuk pengamatan konsentrsi spermatozoa Hartini, 2011.
Untuk jaringan testis yang telah diambil, difiksasi dalam larutan Bouin dan dibiarkan selama kurang lebih 24 jam. Kemudian dilakukan pencucian, yaitu
mencuci organ dengan alkohol 70 yang dilakukan berulang-ulang selama kurang lebih 30 menit. Hal ini bertujuan agar warna kuning larutan Bouin
berkurang atau tampak jernih. Jaringan didehidrasi dalam larutan alkohol bertingkat dari alkohol 70, 80, 96 dan alkohol absolut selama kurang lebih 1
jam untuk menarik molekul air yang keluar dari jaringan. Selanjutnya, jaringan dijernihkan dengan larutan benzil benzoat selama 24 jam, lalu dalam benzil
sebanyak 2 kali 15 menit sampai jaringan tampak jernih atau transparan Ilyas, 2007.
Setelah itu, dilakukan infiltrasi dengan parafin dalam beberapa tahap, yaitu jaringan direndam dalam parafin I selama 30 menit, parafin II selama 60 menit,
dan parafin III selama 90 menit. Infiltrasi dilakukan dalam oven dengan suhu 56
o
C-58
o
C. Perlakuan berikutnya adalah penanaman jaringan dalam parafin cair lalu diletakkan dalam kotak kertas sesuai dengan ukuran masing-masing jaringan
yang akan ditanam. Kotak kertas yang telah berisi jaringan dimasukkan dalam lemari es dan dibiarkan membeku Kusmana, 2001.
Selanjutnya, pemotongan jaringan setebal 3-6µm dengan menggunakan pisau mikrotom putar dan hasil irisam ditempelkan pada kaca objek. Preparat pada
kaca objek dipanaskan sampai jaringan mengembang dengan sempurna. Sebelum jaringan diwarnai, sediaan direndam dalam xilol selama 5 menit sebanyak 2 kali.
Hal tersebut bertujuan agar sisa parafin yang masih merekat pada jaringan dapat dihilangkan. Xilol dihilangkan dengan merendam jaringan pada larutan alkohol
bertingkat dari konsentrasi tinggi turun secara bertahap 100, 90, 80, dan
