Identifikasi saponin Uji Pendahuluan Ekstrak

Dari hasil kromatografi di atas Gambar, di dapatkan bahwa bercak 6 dan 10 yang berwarna kuning berubah menjadi hijau, serta bercak 3, 5 dan 7 yang tidak berwarna berubah warna menjadi warna hijau dengan reagen Liebermann- Burchard. Perubahan warna menjadi hijau ini menunjukkan terdapatnya kandungan steroid dalam ekstrak n-heksana daun binahong. Selain itu, identifikasi steroid juga ditegaskan oleh reaksi dengan H 2 SO 4 - metanol 1:1 yang menghasilkan bercak 4, 5, dan 9 yang berubah warna menjadi warna merah, serta 3, 6, 7, dan 8 yang berubah warna menjadi warna ungu. Menurut Harborne 1984, sampel positif mengandung steroid bila berubah menjadi merah, oleh karena itu, disimpulkan bahwa ekstrak n-heksana daun binahong mengandung steroid dengan uji Liebermann-Burchard dan H 2 SO 4 . Dari seluruh uji identifikasi, hasilnya disatukan dalam tabel. Tabel VI. Menunjukkan ada tidaknya kandungan golongan senyawa tertentu dalam ekstrak n-heksana daun binahong. Tabel VI. Hasil uji fitokimia ekstrak n-heksana daun binahong Keterangan: +: ada -: tidak ada Golongan senyawa Hasil uji pendahuluan Flavonoid - Tanin - Alkaloid - Saponin - Triterpenoid - Steroid + Uji identifikasi senyawa dalam ekstrak n-heksana daun binahong menunjukkan hasil positif hanya pada uji steroid. Uji identifikasi dengan uji warna ini sangat memiliki kekurangan. Dimana dalam uji ini, tidak bisa untuk menganalisis golongan senyawa dalam ekstrak dengan kadar yang kecil, karena perubahan yang sangat kecil sulit dilihat secara visual. Oleh karena itu, akan dilakukan identifikasi yang lebih lanjut dengan proses elusidasi struktur.

E. Isolasi dengan Kromatografi Kolom

Proses elusidasi struktur membutuhkan sampel dengan kandungan senyawa murni. Oleh karena di dalam ekstrak masih terdapat bermacam-macam senyawa harus terlebih dahulu dimurnikan atau dipisahkan dari senyawa lain. Pemurnian senyawa ini dapat dilakukan dengan cara kromatografi. Ekstrak yang digunakan dalam penelitian ini merupakan ekstrak dengan pelarut n-heksana, maka senyawa-senyawa yang terkandung didalamnya merupakan senyawa lipofil non-polar. Oleh karena itu, pemilihan kromatografi kolom dalam awal proses isolasi merujuk pada Székely cit., Hostettmann, Hostettmann, dan Marston, 1995, dimana krombinasi yang dapat dilakukan dalam mengisolasi senyawa lipofil, salah satunya dengan menggunakan kromatografi cair dan kromatografi padat, misalnya menggunakan kombinasi kolom terbuka yang dilanjutkan dengan KLT preparatif. Selain itu, pemilihan kromatografi kolom karena dapat digunakan dengan volume sampel yang cukup besar. Dalam proses ini, tidak diberikan tekanan untuk mempercepat aliran fase gerak agar pemisahan dapat lebih dimaksimalkan.