s p
m d
J 4
m 5
9 d
m a
m d
I m
j d
d suhu 60°C
parafin kemu Selanju
mikron deng dibentangka
Jaringan dile 40°C selama
Sebelu mencelupkan
5 menit, dil 95, 90
dengan air k Pewar
menit dan ak akuades m
mencelupkan dengan alko
III 3 menit. masing sela
jaringan den Pengam
dengan men ditunjukkan
Gam dilanjutkan
udian dibuat utnya jaring
gan mikrotom an dalam ak
etakkan pad a ±24 jam.
um pewarna n jaringan p
lanjutkan de dan 80 se
kran 5 menit rnaan dengan
kuades mini inimal 5 m
n pada alko ohol absolut
Tahap clea ama 3 meni
ngan kanada matan histo
nghitung rata dengan tand
mbar 6. Peng n dengan em
t blok-blok j gan yang su
m dan hasil kuades yang
da gelas obje aan dilakuka
pada gelas ob engan alkoho
elama 3 me dilanjutkan
n hematoksi imal 5 menit
menit. Ta hol 70, 80
I 30 detik, a aring dengan
t. Dilanjut balsam kem
ologi usus a-rata tebal m
da p
gukuran teba
Tebal mukosa
mbedding y aringan.
udah dalam potongan di
g dipanaska ek kemudian
an deparafi bjek ke dalam
ol absolut I nit dan alko
dengan akua ilin selama 2
t dilanjutkan ahap beriku
0, 90 da alkohol abso
n mencelupk tkan dengan
mudian ditutu halus yaitu
mukosa setia pada Gambar
al mukosa pa yaitu penan
blok paraf irendam dala
an dalam w n di masukk
finasi dan r m xylol I, II
II,II, I sela ohol 70 s
ades minima 25 detik dicu
n dengan eo utnya adala
an 95 bebe olut II 1 men
kan pada xyl n mounting
up dengan g u duodenum
ap 10 vili pe r 6.
ada usus hal naman jaring
fin dipotong am akuades
waterbath su an ke dalam
rehidrasi de I 3 menit da
ama 3 men elama 5 me
al 5 menit. uci dengan a
osin 5 menit ah dehidra
erapa detik d nit dan alkoh
lol I,II dan I dengan cara
gelas penutup m, jejenum
er usus. Teb
lus gan dalam
g setebal 4 berikutnya
uhu 37°C. m inkubator
engan cara an xylol III
nit, alkohol enit, dicuci
air keran 5 t kemudian
si dengan dilanjutkan
hol absolut III masing-
a menetesi p.
dan ileum bal mukosa
23. Analisis imunohistokimia imunoglobulin A IgA jaringan usus halus tikus percobaan
Kandungan Imunoglobulin A Ig A pada usus halus tikus percobaan secara
imunohistokimia dianalisis dengan metode Kiernan 1990.
Prosedur analisis imunohistokimia immunoglobulin A adalah sebagai berikut : dari awal preparasi
sampel usus hingga tahap embedding dan pemotongan blok jaringan dengan mikrotom sama dengan pewarnaan hematoksilin-eosin kecuali pada tahap
pelekatan preparat usus ke gelas objek dimana gelas objek sebelum digunakan harus dicuci bersih dengan teknik sonikasi kemudian dikeringkan dan diberi
larutan neofren dalam toluen toluen : neofren = 9:1. Pemberian neofren dengan tujuan agar preparat usus menempel dengan baik pada gelas objek dan tidak
mudah terlepas pada saat proses pewarnaan imunohistokimia. Tahap analisis imunohistokimia diawali dengan deparafinisasi yaitu sediaan
dimasukkan ke dalam serial larutan xylol III, II dan I dengan tujuan untuk melarutkan parafin dari jaringan. Selanjutnya dilakukan rehidrasi yaitu sediaan di
masukkan ke dalam serial larutan alkohol alkohol absolut III, II, dan I, alkohol 95, 90, 80 dan 70. Sediaan kemudian direndam dalam air bebas ion selama 15
menit. Tahap berikut adalah penghilangan peroksidase endogen dengan mencelupkan sediaan dalam campuran metanol 30 ml dan H
2
O
2
0.5 ml selama 15 menit. Sediaan direndam dalam air bebas ion sebanyak dua kali masing-
masing selama 5 menit, kemudian direndam dalam PBS sebanyak dua kali masing-masing 5 menit. Sediaan kemudian diletakkan pada kotak sediaan dan
masing-masing ditetesi 50-60 µl normal serum 10 dalam PBS kemudiaan di inkubasi pada suhu 37°C, 60 menit. Sediaan kemudian dicuci dengan PBS
sebanyak 3 kali masing-masing 5 menit, lalu ditetesi dengan antibodi primermonoklonal yaitu IgA Anti-Rat IgA,
α-chain spesific Developed in Goat, SIGMA dalam PBS 1:500 sebanyak 50-60 µl, diinkubasi dalam refrigerator
selama satu malam ±19 jam. Selanjutnya dicuci dengan PBS sebanyak 3 kali masing-masing 10 menit. Sediaan ditetesi dengan antibodi sekunder DEPS
DAKO Envision Peroxydase System 50-60 µl, pada kondisi gelap, kemudian diinkubasi pada 37°C selama 60 menit. Sediaan dicuci 3 kali dengan PBS
masing-masing selama 5 menit. Berikutnya dilakukan visualisai dengan DAB 3,3’-Diaminobenzidine Tetrahydrochloride-Plus Kit substrate for Horsedish
