Pembuatan Pembuatan Fraksinasi Fraksinasi Pemurnian Pemurnian

ISBN: ISBN: ISBN: ISBN: 978-602-18580-2-8 978-602-18580-2-8 978-602-18580-2-8 978-602-18580-2-8 153 153 153 153 mengandung rennin 88-94 dan pepsin 6-12 pe, sedangkam dari sapi dewasa kandungan renin 6-10 dan pepsin mencapai 90 persen Daulay 1990. Ekstrak abomasum cempe kambing dan domba juga mengandung rennin dan banyak digunakan untuk penggumpalan susu karena keju yang dihasilkan beraroma khas Scott, 1986. Chymosin adalah proteinase yang disekresikan abomasum ruminansia masih mnyusu. Chymosin sapi telah lama digunakan untuk pembuatan keju secara tradisional. Pemurnian dan karakterisasi chymosin juga telah dikaji secara intensif Foltman, 1993. Fraksinasi enzim dengan ammonium sulfat didasarkan kelarutan protein karena interaksi polar protein dengan air, interaksi ionik garam dalam larutan protein dan daya tolak antar protein yang bermuatan sama. Kelarutan protein akibat meningkatnya konsentrasi garam pada suhu dan pH konstan disebut “ salting in” dan pengendapan protein karena meningkatnya konsentrasi garam disebut “salting out”. Kedua fenomena itu sebagai dasar untuk pemurnian enzim. Penurunan konsentrasi garam secara bertahap akan diikuti pengendapan protein secara bertahap pula Scope, 1981. Enzim renin chymosin cairan abomasum domba dan kambing dapat difraksinasi melalui presipitasi dengan ammonium sulfat kejenuhan 40-80. Presipitat yang dihasilkan memiliki aktivitas chymosin lebih tinggi dari ekstrak kasar. Penambahan presipitat chymosin 2 dalam waktu 10 menit sebagaian besar susu menggumpal, sedangkan jika digunakan ekstrak kasar untuk menggumpalkan volume susu sama membutuhkan dosis 10 dan waktu inkubasi 1 jam. Susu yang digumpalkan dengan presipitat chymosin dihasilkan keju lebih kompak dan padat dibandingkan susu ditambah ekstrak kasar. Melalui frakasinasi dihasilkan presipitat chymosin kemurniannya semakin meningkat sehingga dosis penggunaannya lebih hemat Setyawardani et al., 2005. METODE METODE METODE METODE PENELITIAN PENELITIAN PENELITIAN PENELITIAN A. A. A.

A. Pembuatan Pembuatan

Pembuatan Pembuatan Sediaan Sediaan Sediaan Sediaan Ekstrak Ekstrak Ekstrak Ekstrak Kasar Kasar Kasar Kasar Abomasum Abomasum Abomasum Abomasum Kambing Kambing Kambing Kambing Abomasum setelah bersihkan dibuat potongan kecil dan direndam dalam methanol 12 jam untuk membuanga lemak. Dihancurkan dengan blender dan ditambah larutan asam asetat 1,5, diaduk dengan magnetik stirer selama 3 jam. Disentrifugasi 5.000 rpm, 15 menit. Supernatan diuji aktivitasnya dengan 10 ml susu sapi segar pada suhu suhu 35 C selama 40 menit. Satu unit aktivitas chymosin dinyatakan banyaknya ml susu digumpalkan oleh 1 ml ekstrak abomasum selama 40 menit. Daya gumpal susu dinyatakan jumlah ml susu yang dapat digumpalkan oleh 1 ml ekstrak abomasum per menit.. ISBN: ISBN: ISBN: ISBN: 978-602-18580-2-8 978-602-18580-2-8 978-602-18580-2-8 978-602-18580-2-8 154 154 154 154 B. B. B.

B. Fraksinasi Fraksinasi

Fraksinasi Fraksinasi Chymosin Chymosin Chymosin Chymosin Dengan Dengan Dengan Dengan Amonium Amonium Amonium Amonium Sulfat Sulfat Sulfat Sulfat Chymosin dalam supernatan difraksinasi dengan ammonium sulfat kejenuhan 20-80. Diukur volume supernatan diperoleh dan ditambah kristal ammonium sulfat 20-80 persen. Presipitat dihasilkan masing-masing fraksi ammonium sulfat diuji aktivitas chymosinnya selama 40 menit dan daya gumpalnya terhadap susu per menit. C. C. C.

C. Pemurnian Pemurnian

Pemurnian Pemurnian Chymosin Chymosin Chymosin Chymosin Dengan Dengan Dengan Dengan Syringe Syringe Syringe Syringe Membrane Membrane Membrane Membrane Presipitat fraksi mmonium sulfat 20-80 yang memiliki aktivitas chymosin dan daya gumpal susu tinggi dikumpulkan dikomposit. Presipitat disaring dengan syringe membrane 0,1 - 1,0 μm. Presipitat chymosin dahsilkan disaring dengan disposable syringe membrane sesuai pori telah ditetapkan Cairan yang dapat melewati membran ditampung dalam becker glas, kemudian di uji aktivitas dan daya gumpalnya terhadap susu. HASIL HASIL HASIL HASIL DAN DAN DAN DAN PEMBAHASAN PEMBAHASAN PEMBAHASAN PEMBAHASAN A. A. A. A. Aktivitas