3. BAHAN DAN METODE PENELITIAN
3. 1. Waktu dan Tempat
Penelitian ini dilaksanakan dari bulan Maret 2009 sampai dengan Oktober 2010. Tempat pelaksanaan penelitian untuk uji fitokimia adalah
Laboratorium Mikrobiologi dan Biokimia Hasil Perairan, Departemen Teknologi Hasil Perairan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Institut Pertanian Bogor.
Pengujian aktivitas antioksidan dengan metode penangkapan radikal bebas DPPH adalah Laboratorium Kimia Pangan, SEAFAST Centre, Institut Pertanian Bogor.
Pembuatan pakan mencit C3H dilaksanakan di Pilot Plant SEAFAST Centre, Institut Pertanian Bogor.
Pengujian aktivitas antitumor dari
bubuk daun cincau hijau
P. oblongifolia Merr. secara in vivo, pengolahan jaringan tumor mencit C3H dan pewarnaan HE dilakukan di Laboratorium Patologi Eksperimental, Departemen
Patologi Anatomik, Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia. Deteksi keberadaan CD31 dan enzim kaspase-3 dari jaringan tumor payudara mencit C3H
dengan pewarnaan IHK imunohistokimia dilakukan di Laboratorium Riset Patologi, Fakultas Kedokteran Hewan, Institut Pertanian Bogor.
3. 2. Bahan
Bahan baku yang akan digunakan dalam penelitian ini adalah daun tanaman cincau hijau P. oblongifolia Merr.. Peralatan dan perangkat yang
dipergunakan dalam penelitian ini terdiri atas peralatan untuk preparasi bahan baku, uji fitokimia, uji aktivitas antioksidan dengan metode DPPH, uji in vivo,
pewarnaan HE dan IHK. Bahan-bahan kimia untuk uji aktivitas antioksidan dengan metode DPPH
adalah 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl DPPH, butylated hydroxytoluene BHT sebagai kontrol positif dan metanol pro analysis sebagai pelarut. Bahan-bahan
untuk uji fitokimia adalah akuades, asam sulfat 2 N, pereaksi Mayer, Dragendorff dan Wagner, asam asetat anhidrida, kloroform, asam sulfat pekat, HCl 2 N, etanol
70, FeCl
3
Bahan untuk membuat pakan terdiri dari kasein, minyak jagung sebagai 5, pereaksi molisch, pereaksi benedict, pereaksi biuret dan larutan
ninhidrin.
sumber lemak, tepung maizena alpha corn starch merk Honing sebagai sumber energi, CMC carboxyl methyl cellulose sebagai sumber selulosa, Bekamin 10
Kimia Farma yang pada tiap tabletnya mengandung vitamin A 1500 SI, tiamin 1 mg, riboflavin 0,5 mg, piridoksin 0,5 mg, niasin 10 mg, vitamin B 5 mg, asam
folat 0,5 mg, vitamin B
12
0,5 mg, vitamin C 25 mg, vitamin B
5
dan vitamin D
2
Tabel 3 Komposisi mineral untuk pakan mencit 150 SI. Komposisi mineral diperoleh dari Laboratorium Biokimia Pangan dan
Gizi, Fakultas Teknologi Pertanian IPB dengan komposisi yang disajikan dalam Tabel 3. Peralatan dalam pembuatan pakan meliputi wadah baskom, spatula,
kantong plastik, alat pencetak pelet dan drum dryer.
Jenis mineral Jumlah dalam 100 g
NaCl 139,30
KI 0,79
KH
2
PO 389
4
MgSO
4
.7H
2
57,30 O
CaCO 381,40
3
FeSO
4
. 7H
2
27 O
MnSO
4
. 7H
2
4,01 O
ZnSO
4
. 7H
2
0,55 O
CuSO
4
. 5H
2
0,48 O
CoCl
2
. 6H
2
0,02 O
Bahan untuk pengujian in vivo adalah mencit Mus musculus L C3H, baik donor maupun resipien. Mencit C3H berasal dari Laboratorium Patologi
Eksperimental, Departemen Patologi Anatomik, Fakultas Kedokteran, Universitas Indonesia. Bahan kimia yang digunakan untuk pengolahan jaringan adalah
formalin, larutan Bouin, asam asetat glasial, paraffin, xylol, etanol 70 dan 60, larutan PBS phosphate buffer saline, larutan NaCl fisiologis dan neofren.
Peralatan untuk pengolahan jaringan meliputi oven, cetakan antikarat, forsep, lemari pendingin serta gelas objek dan penutupnya.
Bahan yang digunakan untuk pewarnaan HE dan IHK adalah jaringan tumor payudara mencit C3H. Bahan khusus untuk pewarnaan HE meliputi
pewarna hematoksilin dan eosin. Bahan khusus untuk pewarnaan IHK meliputi antibodi primer anti-CD31 rabbit antimouse dari Biorbyt nomor katalog
orb10315, antibodi primer antikaspase-3 rabbit antimouse dari Cell Signaling Technology nomor katalog 9662, antibodi sekunder antirabbit IgG HRP-linked
antibody goat antirabbit dari Cell Signaling Technology nomor katalog 7074
dan substrat DAB diaminobenzidine. Peralatan untuk pewarnaan IHK meliputi gelas objek dan penutupnya, kotak plastik, tisu, batang kaca, alat penghitung
waktu timer, lemari pendingin dan lembar protokol IHK.
3. 3. Preparasi Sampel Daun Cincau Hijau P. oblongifolia Merr.
Kategori