2. Bahan Mekanisme aktivitas antitumor bubuk daun cincau hijau (Premna blongifolia Merr.) pada mencit c3h yang ditransplantasi sel tumor payudara

sumber lemak, tepung maizena alpha corn starch merk Honing sebagai sumber energi, CMC carboxyl methyl cellulose sebagai sumber selulosa, Bekamin 10 Kimia Farma yang pada tiap tabletnya mengandung vitamin A 1500 SI, tiamin 1 mg, riboflavin 0,5 mg, piridoksin 0,5 mg, niasin 10 mg, vitamin B 5 mg, asam folat 0,5 mg, vitamin B 12 0,5 mg, vitamin C 25 mg, vitamin B 5 dan vitamin D 2 Tabel 3 Komposisi mineral untuk pakan mencit 150 SI. Komposisi mineral diperoleh dari Laboratorium Biokimia Pangan dan Gizi, Fakultas Teknologi Pertanian IPB dengan komposisi yang disajikan dalam Tabel 3. Peralatan dalam pembuatan pakan meliputi wadah baskom, spatula, kantong plastik, alat pencetak pelet dan drum dryer. Jenis mineral Jumlah dalam 100 g NaCl 139,30 KI 0,79 KH 2 PO 389 4 MgSO 4 .7H 2 57,30 O CaCO 381,40 3 FeSO 4 . 7H 2 27 O MnSO 4 . 7H 2 4,01 O ZnSO 4 . 7H 2 0,55 O CuSO 4 . 5H 2 0,48 O CoCl 2 . 6H 2 0,02 O Bahan untuk pengujian in vivo adalah mencit Mus musculus L C3H, baik donor maupun resipien. Mencit C3H berasal dari Laboratorium Patologi Eksperimental, Departemen Patologi Anatomik, Fakultas Kedokteran, Universitas Indonesia. Bahan kimia yang digunakan untuk pengolahan jaringan adalah formalin, larutan Bouin, asam asetat glasial, paraffin, xylol, etanol 70 dan 60, larutan PBS phosphate buffer saline, larutan NaCl fisiologis dan neofren. Peralatan untuk pengolahan jaringan meliputi oven, cetakan antikarat, forsep, lemari pendingin serta gelas objek dan penutupnya. Bahan yang digunakan untuk pewarnaan HE dan IHK adalah jaringan tumor payudara mencit C3H. Bahan khusus untuk pewarnaan HE meliputi pewarna hematoksilin dan eosin. Bahan khusus untuk pewarnaan IHK meliputi antibodi primer anti-CD31 rabbit antimouse dari Biorbyt nomor katalog orb10315, antibodi primer antikaspase-3 rabbit antimouse dari Cell Signaling Technology nomor katalog 9662, antibodi sekunder antirabbit IgG HRP-linked antibody goat antirabbit dari Cell Signaling Technology nomor katalog 7074 dan substrat DAB diaminobenzidine. Peralatan untuk pewarnaan IHK meliputi gelas objek dan penutupnya, kotak plastik, tisu, batang kaca, alat penghitung waktu timer, lemari pendingin dan lembar protokol IHK. 3. 3. Preparasi Sampel Daun Cincau Hijau P. oblongifolia Merr. Pembuatan bubuk daun dan persiapan pakan untuk uji in vivo pada mencit C3H dilakukan oleh tim penelitian cincau hijau yang terdiri dari Emma Rochima, Mutiara Prihatini, Nindira Aryudhani dan Rachmat Widyanto. a Pembuatan bubuk daun cincau hijau P. oblongifolia Merr. Daun cincau hijau P. oblongifolia Merr. diperoleh dari daerah Balumbang Jaya, Kecamatan Bogor Barat, Kotamadya Bogor. Pembuatan bubuk daun cincau hijau P. oblongifolia Merr. diawali dengan pemilihan daun segar, kemudian dicuci bersih dengan air. Selanjutnya, daun ditambah air dengan perbandingan 1:3. Kemudian daun diremas-remas dengan air hingga hancur , dibiarkan semalam agar menjadi gel, dikeringkan dengan drum dryer dan dihancurkan kembali dengan blender, sehingga diperoleh bubuk daun cincau hijau dengan ukuran partikel yang lebih kecil. Diagram alir pembuatan bubuk daun cincau hijau P. oblongifolia Merr. disajikan pada Gambar 10. Gambar 10 Diagram alir pembuatan bubuk daun cincau hijau

P. oblongifolia Merr.

Daun cincau hijau P. oblongifolia Merr. segar Diremas-remas dengan air hingga hancur Didiamkan semalam Dikeringkan dengan drum dryer Bubuk daun cincau hijau P. oblongifolia Merr. Pakan dibuat untuk lima kelompok mencit. Kelompok mencit pertama A, sebagai kontrol negatif dan kedua B, sebagai kontrol positif diberi pakan dengan dosis bubuk daun 0 bb. Kelompok mencit ketiga C 0,88 bb. Kelompok mencit keempat D 1,76 bb. Kelompok mencit kelima E 2,64 bb. b Persiapan pakan untuk uji in vivo pada mencit C3H Pakan tanpa penambahan bubuk daun cincau hijau P. oblongifolia Merr. selanjutnya disebut pakan standar. Pakan dengan penambahan bubuk daun cincau hijau P. oblongifolia Merr. disebut pakan uji. Pada penelitian ini, modifikasi komposisi pakan standar dan pakan uji mencit C3H dari AIN 1976 dilakukan pada persentase komposisi pakan. Modifikasi dari Chalid 2003 dilakukan pada dosis bubuk daun cincau hijau. Chalid 2003 menggunakan satu dosis pada pakan uji, yaitu 0,88. Penelitian ini menggunakan tiga dosis bubuk daun cincau hijau P. oblongifolia Merr. pada pakan uji, yaitu 0,88, 1,76 dan 2,64. Komposisi pakan mencit disajikan dalam Tabel 4. Pakan dibuat dengan mencampurkan semua bahan-bahan penyusun pakan dalam wadah baskom. Pada wadah pertama, pencampuran diawali dari bahan yang bobotnya paling kecil, yaitu vitamin dan mineral. CMC ditambahkan ke dalam campuran. Setelah tercampur, kasein sebagai sumber protein ditambahkan. Pada wadah yang lain, air dicampurkan dengan tepung maizena. Campuran air dan tepung maizena dibagi menjadi dua bagian, yaitu bagian 23 wadah kedua dan 13 wadah ketiga. Bagian 23 disebut basis air dan bagian 13 disebut basis minyak. Selanjutnya, campuran pada wadah pertama dicampurkan pada wadah ketiga. Setelah tercampur rata, campuran tersebut dicampurkan dengan wadah kedua. Kemudian, campuran tersebut dibuat pelet. Pelet dibuat dengan cara mencampurkan sedikit air ke adonan pakan dengan perbandingan 200 ml airkg adonan pakan. Adonan pakan dimasukkan ke alat pencetak pelet dan dikeringkan dengan spray dryer selama 4-5 jam.