dalam botol ekstrak berukuran 60 ml yang transparan sehingga botol harus dibungkus dengan aluminum foil untuk mencegah DPPH bereaksi dengan cahaya.
Setelah dilakukan pengenceran sampel dan pembuatan larutan DPPH, larutan DPPH dipipet sebanyak 1 ml dengan mikropipet ke dalam tiap botol
ekstrak coklat. Larutan kemudian diinkubasi dalam inkubator pada suhu 37,5 °C yang sesuai dengan suhu normal tubuh manusia, selama 30 menit agar DPPH
dapat bereaksi. Inkubasi dilakukan satu per satu dengan interval waktu 5 menit dan setelah inkubasi mencapai waktu 30 menit, maka pengukuran aktivitas
antioksidan untuk tiap botol dengan spektrofotometer juga dilakukan satu per satu dengan interval waktu 5 menit. Pengukuran menggunakan spektrofotometer
UV-Visible UV-Vis Shimadzu pada panjang gelombang 517 nm, sebagai blanko digunakan metanol pro analysis.
Aktivitas penangkapan terhadap radikal bebas ditetapkan sebagai persentase penghambatan yang dapat dihitung berdasarkan persamaan:
Keterangan: AB = absorbansi blanko
AS = absorbansi larutan standar atau sampel
3. 6. Perlakuan terhadap Mencit C3H
Mencit C3H sebanyak 25 ekor dibagi menjadi lima kelompok, masing- masing kelompok terdiri atas lima ekor mencit. Tiap kelompok mencit
menempati satu kandang yang terbuat dari plastik dan ditempatkan dalam satu ruangan yang telah diatur siklus udara dan cahayanya. Semua mencit diberi pakan
secara teratur dan ditempatkan dalam ruangan suhu kamar dan dilengkapi blower untuk menjaga kelembaban lingkungan. Pemberian pakan dilakukan tiap hari
antara pukul 07.00 sampai dengan 09.00 WIB. Jumlah pakan yang diberikan sebanyak +5 g. Banyaknya pakan yang dikonsumsi dihitung tiap hari
berdasarkan jumlah pakan yang tersisa. Masa perlakuan didahului oleh masa adaptasi selama seminggu. Pada
masa adaptasi, mencit diberi pakan standar kontrol sebagai makanan dan air sebagai minuman ad libitum. Pemberian pakan dilakukan selama 46 hari yang
100 ×
− =
AB AS
AB Inhibisi
terdiri dari 6 hari adaptasi, 24 hari sebelum transplantasi dan 22 hari setelah transplantasi. Setelah masa adaptasi, pemberian pakan dilanjutkan dengan
pakan uji sesuai dengan kelompok mencit, sebagaimana disajikan pada Tabel 5.
Tabel 5 Perlakuan terhadap mencit C3H
Kelompok mencit Dosis bubuk daun cincau
hijau pada pakan Transplantasi tumor
A tidak
B ya
C 0,88
ya D
1,76 ya
E 2,64
ya
Diagram alir pengujian in vivo pada mencit C3H secara ringkas disajikan pada Gambar 11.
Gambar 11 Diagram alir pengujian in vivo pada mencit C3H
Mencit B, C, D dan E ditransplantasi dengan tumor dari mencit donor
Pengamatan: 1.
Jumlah pakan yang dikonsumsi
per hari per individu per
kelompok
2. Berat badan dua
kali dalam satu pekan
Hari ke-46: Semua mencit dimatikan dan diambil
tumornya Pengamatan:
1. Jumlah pakan
yang dikonsumsi per hari per
individu per kelompok
2. Berat badan dua
kali dalam satu pekan
3. Ukuran tumor
dua kali dalam satu pekan
25 ekor mencit dibagi dalam lima kelompok masing-masing lima
ekor; masing-masing kelompok diberi pakan:
A = pakan standar kontrol negatif,
dosis bubuk daun cincau hijau B = pakan standar kontrol positif,
dosis bubuk daun cincau hijau C = pakan dengan dosis bubuk daun
cincau hijau 0,88 D = pakan dengan dosis bubuk daun
cincau hijau 1,76 E = pakan dengan dosis bubuk daun
cincau hijau 2,64 Masa Perlakuan
setelah masa adaptasi
Hari ke-1
Hari ke-24
Hari ke-46 Adaptasi
selama 6 hari
Pengukuran berat badan dilakukan dua kali seminggu, yaitu setiap hari Senin dan Kamis. Berat badan diukur mulai dari masa adaptasi, awal
pertumbuhan dan setelah transplantasi tumor. Mencit ditimbang dengan neraca OHAUS dengan satuan gram g. Transplantasi dilakukan dengan menyuntikkan
suspensi sel tumor payudara dari mencit donor sebanyak 0,20 ml ±10
6
Pengukuran volume tumor juga dilakukan dua kali seminggu pada hari Senin dan Kamis. Volume tumor mulai diukur setelah transplantasi tumor, yaitu
setelah masa laten. Masa laten diukur dengan cara perabaan. Jaringan tumor pada mencit diambil dan ditimbang pada saat terminasi.
sel hidup kepada mencit kelompok B, C, D dan E pada daerah subkutan aksila kanan.
3. 7. Mencit Donor
