Penentuan substansi pektat Perhitungan Berat sampel = w g

Pengawasan Mutu Bahan Produk Pangan 348

16.1.1.9 Penentuan substansi pektat

16.1.1.9.1 Metode Kolorimetrik Prinsip penentuan substansi pek-

tat dengan metode kolorimetrik didasarkan atas reaksi antara O- hidroksi difenil dengan anhidro- galakturonat sehingga mengha- silkan warna yang dapat diukur pada panjang gelombang 520 nm. Pereaksi yang digunakan dalam penentuan substansi pektat ada- lah : 1. Larutan versene 0.5 Larutan ini dibuat dengan me- larutkan 5 g EDTA-4 Na dalam akuades hingga volu-me 1 liter. 2. Larutan tetraborat sulfat Larutan Na 2 B 4 O 7 0.0125 M dalam H 2 SO 4 pekat 3. Larutan O-hidroksidifenil Larutan O-hidroksidifenil dipe- roleh dengan melarutkan 1.5 g O-hidroksidifenil dalam 1000 ml NAOH 0.5 persen. 4. NaOH 0.05 N Peralatan yang digunakan : 1. Vortex mixer 2. Spektrofotometer 3. Penangas air 4. Penangas es ice bath Cara kerja : a. Penetapan sampel 1. Timbang sampel dalam ben- tuk tepung lolos ayakan 30 mesh sebanyak 0.5 g. 2. Ekstraksi dengan 25 ml etanol 70 untuk menghilangkan gula-gula. 3. Saring, endapannya diambil lalu tambahkan 200 ml larutan versen 0.5 persen. 4. Inkubasi pada suhu 25 o C selama 30 menit untuk melarutkan substansi pektat di dalam sampel. 5. Asamkan campuran sampai pH 5 – 5.5 dengan meng- gunakan asam asetat, kemu- dian tambahkan 0.1 g pekti- nase, inkubasi pada 25 o C selama satu jam. 6. Tambahkan akuades sehing- ga volume campuran menjadi 250 ml, kemudian saring. 7. Dari filtrat yang diperoleh, ambil 0.8 ml lalu tambahkan kedalamnya 4.8 ml larutan tetraborat sulfat. 8. Dinginkan dengan penangas es sampai suhu campuran mencapai 4 o C, kemudian kocok dengan vortex mixer. 9. Panaskan dengan penangas air bersuhu 100 o C selama 5 menit, dinginkan kembali de- ngan penangas es sampai suhu 20 o C. 10. Tambahkan 0.08 ml larutan O- hidroksidifenil, kocok kem-bali dengan vortex mixer. 11. Setelah dibiarkan kurang le-bih 5 menit dan warna telah terbentuk sempurna, ukur absorbansinya pada panjang gelombang 520 nm. Di unduh dari : Bukupaket.com Pengawasan Mutu Bahan Produk Pangan 349 12. Pembuatan blanko sama se- perti prosedur di atas, kecuali tidak ditambahkan larutan O- hidroksidifenil.

b. Pembuatan kurva standar 1.